董晓敏，蒋巧俐，吴建华

(武汉大学中南医院1.骨科；2.药学部，武汉 430071)

董晓敏1，蒋巧俐2，吴建华2

(武汉大学中南医院1.骨科；2.药学部，武汉 430071)

目的 评价多药耐药基因1(MDR1)C3435T多态性与癫患者耐药性的关系。方法 全面检索关于MDR1基因C3435T多态性与癫患者耐药性的原始研究，将符合入选标准的研究纳入，采用Meta分析方法对所纳入的研究进行综合分析。结果 共纳入非随机对照研究15项，其中耐药组1 284例，控制组1 620例。未发现发表偏倚，异质性检验中发现CC/(CT+TT)、CT/(CC+TT)和TT/(CC+CT)基因型研究中存在异质性，故采用校正后的随机效应模型(D-L法)进行数据合并。CC/(CT+TT)(OR：1.47，95%CI：0.98～2.22)；CT/(CC+TT)(OR：0.84，95%CI：0.66～1.06)；TT/(CC+CT)(OR：0.76，95%CI：0.50～1.17)。亚组分析显示：成人CC/(CT+TT)(OR：1.73，95%CI：1.03～2.91)；儿童CC/(CT+TT)(OR：0.91，95%CI：0.67～1.23)；成人TT/(CC+CT)(OR：0.69，95%CI：0.40～1.20)；儿童TT/(CC+CT)(OR：1.01，95%CI：0.60～1.71)；成人CT/(CC+TT)(OR：0.76，95%CI：0.56～1.04)；儿童CT/(CC+TT)(OR：1.11，95%CI：0.82～1.49)，均P>0.05。结论 目前尚没有充分的证据表明MDR1基因C3435T的基因型与癫耐药性有关。

多药耐药基因；多态性，基因；耐药；癫；Meta分析

由于这些AEDs有不同的作用机制，因此这种现象可能由非特异性机制所介导。多数AEDs是多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1，MDR1)及其编码产物 P-糖蛋白(P- glycoprotein，P-gp)的底物[1]，而MDR1/ P-gp在脑组织尤其在血脑屏障的表达增强，可将进入脑实质的AEDs泵出，导致进入癫病灶部位AEDs的浓度降低，从而导致患者对AEDs产生耐药性[2]。因此影响P-gp蛋白表达的因素可能与癫耐药性产生有关。研究表明，MDR1基因单核苷酸多态性可能影响P-gp的表达及功能，其中外显子26的C3435T位点的突变与P-gp的表达及活性有关，所以MDRI基因C3435T单核苷酸多态性可能与癫耐药有关[3-4]。目前国内外已有多项关于MDR1基因C3435T多态性与癫耐药相关性的研究，但其结论并不一致。笔者应用Meta分析评价MDRI基因C3435T单核苷酸多态性与癫耐药性的关系。

1 资料与方法

1.1 资料来源 在中国期刊全文数据库(CNKI)、重庆维普数据库、万方数据库以及优秀硕博论文库，用“多药耐药基因1”“MDR1” “ABCB1” “基因多态性” “癫”作为题名或关键词联合检索获得全部有关MDR1与癫的中文文献；同时以“MDR1”“ABCB1”“epilepsy”“polymorphism”，作为关键词联合检索PubMed和EMbase等数据库，获得发表在外文期刊上的研究。并通过文献追溯途径收集关于MDR1基因多态性与癫耐药性的相关研究。

1.2 文献纳入标准 ①2014年3月1日前在国内外公开发表的、并提供原始数据的有关中国人群MDR1基因C3435T多态性与癫耐药性的相关研究，并且对照组为癫药物控制组；② 直接或间接给出统计指标比值比(odds ratio，OR)或率比(rate ratio，RR)及95%置信区间(confidence interval，CI)，以及不同基因型的频率分布资料；③剔除重复发表、重复收录或资料雷同的研究；④观察对象为中国汉族人群；⑤ 对所纳入的文献根据非随机对照临床试验质量评价标准进行文献质量评价，总分为12分，剔除评分低于4分的文献。

1.3 数据提取与统计学处理 ①由3人分别评价文献的质量。采用Stata12.0版统计软件包进行数据分析。观察指标为MDR1基因C3435T 的CC基因型/(CT+TT)基因型、CT基因型/(CC+TT)基因型及TT基因型/(CT+CC)基因型的OR值及其95%CI；②运用Begg’s检验来评估发表偏倚。③根据各个研究的异质性检验结果，选用相应的数据合并方法。如各研究结果间无异质性，则采用Mantel-Haenszel固定效应模型进行数据合并，计算合并OR值及其95%CI；如研究结果间存在异质性，则采用校正后的随机效应模型(D-L法)进行数据合并，计算合并OR值及其95%CI。

2 结果

2.1 文献检索入选结果 在本次研究中，共检索出54篇有关于中国汉族人群MDR1多态性与癫耐药性关系的文献。其中20篇与所研究主题无关而剔除，1篇未提供癫药物控制组的基因分型而剔除，15篇因CNKI和PubMed 重复收录或资料雷同而剔除。在对Hardy-Weinberg平衡检验中发现：有4项研究基因分布不符合Hardy-Weinberg平衡，并且该4项研究样本量较小，并且未对此进行必要的说明及讨论，并且文献质量评价标准均低于4分，剔除。而KWAN等[5]的研究中，笔者发现其癫控制组基因分布不符合Hardy-Weinberg平衡(表1)。一般情况下在研究候选基因与复杂疾病的遗传关联研究当中，常要求对照组符合Hardy-Weinberg平衡，否则会认为其研究的样本代表性差。KWAN等[5]的研究样本量较大，且对控制组纳入的人群要超过耐药组的人群，而且KWAN等[5]对其研究对象采用3种方法检测基因分型，因此笔者还是将其纳入该次Meta的分析中。最后经过严格的筛选，共有15篇文献进入数据合并分析。15篇研究均为非随机对照研究。共累积耐药组1 284例，控制组1 620例。15篇研究的基本情况见表1。

2.2 发表偏倚评估 产生发表偏倚的主要原因是阳性结果的研究易发表，阴性结果的研究不易发表或者研究者本身就放弃做进一步研究，这可能导致部分阴性结果的研究未发表而最终对Meta分析的结果产生影响。为了客观地评价有无发表性偏倚。Z=0.05(continuity corrected)、Pr >|Z|=1.000(continuity corrected)，1.000>0.05故不能认为有显著性发表偏倚，因此纳入的文献可以进行Meta分析(图1)。

2.3 异质性检验 CC/(CT+TT)研究中的χ2=81.83，P<0.001；成人χ2=65.7，P<0.001；儿童χ2=2.7，P>0.05；TT/(CC+CT)研究中的χ2=52.84，P<0.001，成人χ2=46.96，P<0.001；儿童χ2=4.29，P>0.05；CT/(CC+TT)研究中的χ2=31.75，P<0.001，成人χ2=26.33，P<0.001；儿童χ2=0.45，P>0.05；因此该项研究存在异质性尤其来源于成人的相关研究。

2.4 数据合并 由于该项研究异质性明显，故采用校正后的随机效应模型(D-L法)进行数据合并。CC/(CT+TT)基因型OR值为1.47，95%CI为0.98～2.22；TT/(CC+CT)基因型OR值为0.76，95%CI为0.50～1.17；CT/(CC+TT)基因型的OR值为0.84，95%CI为0.66～1.06。这3种基因型合并的OR值及其95%CI包含中线，均P>0.05，说明OR值差异无统计学意义(图2～4)。因此尚不能认为中国人群MDR1 C3435T基因型与癫耐药性有关。亚组分析显示：成人CC/(CT+TT)(OR：1.73，95%CI：1.03～2.91)；儿童CC/(CT+TT)(OR：0.91，95%CI：0.67～1.23)；成人TT/(CC+CT)(OR：0.69，95%CI：0.40～1.20)；儿童TT/(CC+CT)(OR：1.01，95%CI：0.60～1.71)；成人CT/(CC+TT)(OR：0.76，95%CI：0.56～1.04)；儿童CT/(CC+TT)(OR：1.11，95%CI：0.82～1.49)。均P>0.05。因此MDR1 C3435T基因型与癫耐药性无关(图2～4)。

表1 入选的15篇研究的基本情况

图1 两组患者MDR1基因C3435T CC基因型与(CT+TT)基因型比较的Begg漏斗图

3 讨论

脑组织中过度表达有关。目前，对于MDR1基因多态性和P-gp的水平及功能之间的关系尚缺乏足够的生物学证据，多数研究认为，定位在MDR1基因26号外显子的C3435T位点的基因多态性与MDR1基因/P-gp蛋白的表达及功能有明显的相关性[3]。因此推测该基因位点的多态性可能与癫耐药性有关。但近年来有关于MDR1基因C3435T多态性与癫耐药性研究结论迵异。因此笔者利用Meta 分析方法对中国汉族人群MDR1基因C3435T多态性与癫耐药性做综合定量评价。结果显示在中国汉族人群中MDR1基因C3435T的多态性与癫耐药性无关。

本研究存在非常明显的异质性。推测可能与以下几个因素有关：①研究对象差异明显：有4项研究的对象为儿童癫患者[8-11]，有1项研究的对象为颞叶性癫患者[12]，这种各项研究间研究对象的差异，加大了各研究间的异质性。因此笔者对研究对象进行了亚组分析，结果显示：在中国汉族人群中无论是成人还是儿童MDR1 C3435T基因型与癫耐药性无关。②癫耐药组、控制组的标准不一：目前，国际上对耐药性癫的定义尚无统一的标准。对于耐药性何时出现，经过多少种AEDs，发作频率的界定，需要多长时间才能确认这种耐药状况是持续存在的过程等尚有争议。从而导致纳入的研究中受试个体很难保持同质性。这进一步加大了各研究间的异质性。③MDR1基因分析方法：在纳入的15项研究中有较多的研究没有进行基因分型确证试验，因此可能存在基因分型错误，而影响研究结果。

图2 两组患者MDR1基因C3435T CC基因型与T等位基因携带者(CT+TT)比较的森林图

图3 两组患者MDR1基因C3435T TT基因型与C等位基因携带者(CC+CT)比较的森林图

图4 癫耐药组和控制组MDR1基因C3435T CT基因型与(CC+TT)基因型比较的森林图

综上所述，由于本研究存在明显的异质性，且纳入的样本量较小，因此对本研究的结论应谨慎对待。通过Meta分析发现：①目前尚没有充分的证据表明在中国人群中MDR1基因C3435T的基因型与癫耐药性有关。②建议在该类研究中应增大样本量，统一标准，尽可能消除偏差和混杂因素，同时进一步提高实验设计的细致性和科学性，在此基础上更新Meta分析才有可能得出较确切的结论。

[1] KWAN P，BRODIE M J.Potential role of drug transporters in the pathogenesis of medically intractable epilepsy[J].Epilepsia，2005，46(2)：224-235.

[2] LOSCHER W，POTSCHKA H.Drug resistance in brain dis-eases and the role of drug efflux transporters[J].Nat Rev Neurosci，2005，6(8)：591-602.

[3] HOFFMEYER S，BURK O，VON RICHTER O，et al.Fun-ctional polymorphisms of the human multidrug-resistance gene：multiple sequence variations and correlation of one allele with P-glycoprotein expression and activityinvivo[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2000，97(7)：3473-3478.

[4] SIDDIQUI A，KERB R，WEALE M E，et al.Association of multidrug resistance in epilepsy with a polymorphism in the drug-transporter gene ABCB1[J].N Engl J Med，2003，348(15)：1442-1448.

[5] KWAN P，BAUM L，WONG V，et al.Association between ABCB1 C3435T polymorphism and drug-resistant epilepsy in Han Chinese[J].Epilepsy Behav，2007，11(1)：112-117.

[6] LU Y，YAN Y，WANG X F.Antiepileptic drug-induced mu-ltidrug resistance P-glycoprotein overexpression in astrocytes cultured from rat brains[J].Chin Med J(Engl)，2004，117(11)：1682-1686.

[6] HUNG C C，TAI J J，LIN C J，et al.Complex haplotypic effects of the ABCB1 gene on epilepsy treatment response[J].Pharmacogenomics，2005，6(4)：411-417.

[7] 卢强，吴立文.中国汉族人群中难治性颞叶癫与MDR1基因多态性关系的研究/药物难治性颞叶癫危险因素分析[D].北京：中国医学科学院中国协和医科大学，2006：1-20.

[8] 陆骏超，洪震.MDR1、MRP2基因多态性在癫患者中的分布及其与癫病耐药的相关性研究[D].上海： 复旦大学，2007：1-30.

[9] 陈黎，刘昌勤，胡雁，等.儿童癫对药物反应性与多药耐药基因 MDR1C3435T多态性的相关性研究[J].中国当代儿科杂志，2007，9(1)：11-14.

[10] 王水有，高峰，夏哲智，等.儿童难治性癫与MDR1 基因C3435T多态性的相关性[J].浙江医学，2008，30(12)：1307-1312.

[11] 高萱，周水珍，郭倩，等.儿童难治性癫MDR1基因多态性研究[J].临床儿科杂志，2009，27(11)：1014-1018.

[12] 郭桂梅，郭颖杰，林卫红，等.MDR1C3435T基因多态性与抗癫药卡马西平疗效的相关性研究[J].中风与神经疾病杂志，2010，27(2)：128-130.

[13] 丁媛媛，杨凡，刘静，等.多药耐药基因单倍体对中国癫患者丙戊酸钠血药浓度的影响[J].中国临床药理学与治疗学，2010，15(11)：1237-1272.

[14] 狄晴，蒋颖，张颖冬.难治性颞叶癫与多药耐药基因1C3435T多态性的相关性研究[C]//中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编.北京：中华医学会神经病学分会，2010： 405.

[15] DONG L，LUO R，TONG Y，et al.Lack of association bet-ween ABCB1 gene polymorphisms and pharmacoresistant epilepsy：an analysis in a western Chinese pediatric population[J].Brain Res，2011，139(1)： 114-124.

[16] MENG H M，GUO G，REN J，et al.Effects of ABCB1 poly-morphisms on plasma carbamazepine concentrations and pharmacoresistance in Chinese patients with epilepsy[J].Epilepsy Behav，2011，21(1)： 27-30.

[17] 王小燕，林若飞，史道华，等.多药耐药基因1 C3435T 多态性与癫耐药的关联性研究[J].现代生物医学进展，2011，11(14)：2717-2719.

[18] 董通，许贤瑞，齐明山，等.回、汉族癫患者ABCB1基因C3435T多态性与癫耐药的相关性研究[J].中风与神经疾病杂志，2011，28(3)：237-241.

[19] 杨美兰，李涛，黄映华，等.多药耐药基因多态性及其表达物与抗癫药疗效的相关性研究[J].疑难病杂志，2012，11(8)：594-596.

《医药导报》对论文中实验动物描述的要求

根据国家科学技术部1988年颁布的《实验动物管理条例》和卫生部1998年颁布的《医学动物管理实施细则》，《医药导报》杂志对论文中有关实验动物的描述，要求描述以下事项：①品种、品系及亚系的确切名称；②遗传背景或其来源；③微生物检测状况；④性别、年龄、体质量；⑤质量等级及合格证书编号；⑥饲养环境和实验环境(包括温度、相对湿度、送风、光照等条件，饲料、饮水等情况)；⑦健康状况；⑧对动物实验的处理方式。

医学实验动物分为四级：一级为普通级；二级为清洁级；三级为无特定病原体(SPF)级；四级为无菌级(包括悉生动物)。

《医药导报》编辑部

2014-07-04

2014-09-23

董晓敏(1987-)，女，辽宁恒仁人，护师，学士，主要从事医院护理研究。电话：027-67813116，E-mail：283463059@qq.com。

吴建华(1981-)，男，安徽宁国人，主管药师，硕士，主要从事临床药学研究。电话：027-67813199，E-mail：wujianhua122012@126.com。

R971.6；R969.3

B

1004-0781(2015)09-1234-05

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.09.032