陈淼浦，邓 力，李 薇，钟顺平东莞市虎门镇太平人民医院儿科，广东 东莞 53900；广州市儿童医院小儿呼吸科，广东 广州 50080

支气管肺炎是儿科常见的呼吸道疾病，肺炎支原体（MP）是其最为常见的病原体，阿奇霉素是治疗该病常见的药物之一［1］。已有研究表明支气管肺炎患儿存在免疫紊乱，包括以补体（C）及免疫球蛋白（Ig）为代表的体液免疫紊乱，还包括以CD4+、CD8+T细胞亚群为代表的细胞免疫紊乱［2］。作为CD8+T细胞的重要一员，CD8+CD28-抑制性T细胞既可起到免疫增强作用，又可起到免疫抑制作用，因此被称为调节性T细胞（Treg）[3]。有研究发现喘息性肺炎患儿的CD8+CD28-Treg降低［4］，但该细胞在MP感染性支气管肺炎患儿的表达如何，阿奇霉素对其是否有作用等，目前均未见相关研究。为此，本研究在探索该病患儿CD8+CD28-Treg表达的基础上，探索阿奇霉素对其作用，并与红霉素作为对照，过程如下。

1 资料与方法

1.1 患儿资料

选取2012年1月～2014年1月期间我院就诊的支气管肺炎患儿作为观察对象，年龄0.5～6.5岁，平均3.51±3.03岁，男35例女31例。均经血清MP抗体定量检测确诊为MP感染，经临床表现或结合胸片确诊为支气管肺炎。如患儿合并免疫性疾病则排除。选取同期到院就诊的急性上呼吸道感染患儿作为阳性对照组［5］，男37女29例，年龄3.69±3.11岁；以同期健康保健的66名健康儿童作为阴性对照组，男36女30例，年龄3.40±3.02岁。以上3组性别比例及年龄均无统计学差异。

1.2 流式细胞术检测

清晨采集以上3组的静脉血约2 ml，抗凝后采用Ficoll分离获得外周血单个核细胞，随后应用尼龙毛柱获得T淋巴细胞，再与CD8磁珠（MACS）孵育30 min后进行磁珠而分离出CD8+CD28-抑制性T细胞。使用BD多色流式细胞仪检测CD8+CD28-Treg所占T细胞总数的百分比。使用固定穿透剂对胞内细胞因子TGF-β1及IL-10进行染色，使用双激光光源对TGF-β1及IL-10百分含量进行检测[6]。

1.3 PCT及MP-IgM检测

以上述血清作为标本，采用放射免疫法检测PCT含量（单位为ng/ml），采用ELISA法检测MP-IgM含量（单位为kU/L）。上述两种试剂盒均购自南京生物工程研究所，按照试剂盒说明书进行检测［7］。

1.4 治疗方法

将以上66例支气管肺炎患儿分为A组及B组各33例，其中A组男19例女14例，年龄3.52±3.01岁；B组男18例女15例，年龄3.52±3.01岁。A及B组性别比例及年龄同样无统计学差异。A组给予阿奇霉素粉针，10 mg/(kg·d)静脉滴注；B组给予红霉素，30 mg/(kg·d)［8］。疗程5 d。治疗第7天采集静脉血进行上述指标检测。

1.5 统计学方法

定量资料采用均数±标准差表示，采用单因素方差分析进行组间的定量资料分析，治疗前后的比较采用配对t检验，两组间资料比较采用两独立样本t检验，采用Pearson法对定量资料间的相关性进行分析。运用统计软件包SPSS15.0对数据进行处理当P＜0.05认为差异有统计学意义［9］。

2 结果

2.1 3组儿童CD8+CD28-T细胞、PCT及MP-IgM含量比较

治疗前，急性上感患儿CD8+CD28-T细胞、TGF-β 1、IL-10、PCT及MP-IgM与健康组儿童均无统计学差异，但支气管肺炎患儿CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10显著低于另外两组（P＜0.05），而PCT及MP-IGM显著高于另外两组（P＜0.05，表1）。

表1 治疗前3组儿童CD8+CD28-T细胞及其细胞因子、PCT及MP-IGM含量比较(n=66,x±s)

2.2 支气管肺炎患儿治疗前后CD8+CD28-T细胞、PCT及MP-IgM含量变化

治疗前A及B组支气管肺炎患儿的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IGM均无统计学差异。治疗第7天，A及B组的CD8+CD28-T细胞、TGF-β 1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治疗后A组CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10均显著高于B组（P＜0.05），且PCT及MP-IGM显著低于B组（P＜0.05，表2）。

表2 治疗前后A及B组支气管肺炎患儿CD8+CD28-T细胞、PCT及MP-IGM含量对比(n=33,x±s)

2.3 相关性分析

相关性分析结果提示CD8+CD28-T细胞、TGF-β 1、IL-10三者均与PCT及MP-IgM呈显著负相关性，其中CD8+CD28-T细胞及TGF-β1与MP-IGM的相关性最强（表3）。

表3 CD8+CD28-T细胞及其细胞因子与PCT、MP-IGM的相关性分析

3 讨论

MP是一种介于细菌和病毒之间的可独立存活的最小病原微生物［10］。目前多数观点认为MP导致支气管肺炎的发病机制主要有直接侵犯呼吸道与免疫反应诱导的间接免疫-病理损伤两大类型［11］。在参与支气管肺炎免疫紊乱的T细胞亚群中，CD8+T细胞起到重要作用。根据细胞膜是否表达CD28分子，CD8+T细胞可分为CD8+CD28+杀伤性T细胞及CD8+CD28-抑制性T细胞，后者是维持呼吸道免疫稳定的关键因素［12］。与CD4+CD25+Treg类似，CD8+CD28-Treg也分泌TGF-β1及IL-10，后两者是Treg执行免疫抑制的重要细胞因子［13］。作为大环内酯类，阿奇霉素及红霉素治疗支气管肺炎的常用药物［14-18］，但两者的免疫调节效果如何，对CD8+CD28-Treg哪个更显优势，目前尚缺少探讨。

本研究发现，急性上感患儿CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM与健康组儿童均无统计学差异，但支气管肺炎患儿CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10显著低于、而PCT及MP-IgM显著高于急性上感及健康儿童组，其中CD8+CD28-T细胞亚群降低，与柴少卿[19]报道的一致。以上结果说明CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM五者在上感及支气管肺炎存在差异性表达，同时说明：与上感比较，以上五项对支气管肺炎诊断有一定的特异性。相关性分析结果提示CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10三者均与PCT及MP-IgM呈显著负相关性，其中CD8+CD28-T细胞及TGF-β1与MP-IgM的相关性最强，这说明CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10含量越高，则PCT及MP-IgM含量越低，对病情恢复越有利，间接说明CD8+CD28-T细胞所起的免疫抑制作用可能是抗炎的药理学基础，其所分泌的TGF-β1及IL-10可能是抑炎的主要细胞因子，因此以上三者可能是对支气管肺炎患儿有利的指标，而PCT及MP-IgM则说明炎症程度，是相对不利的指标。

治疗前两组支气管肺炎患儿的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM均无统计学差异，说明两组分组具有均衡性及可比性。从治疗的反应看，治疗后A及B组的CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治疗后A组CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10尽管尚未完全回升至健康组儿童的水平，但均已显著高于治疗前并显著高于B组，且PCT及MP-IgM已显著低于B组；而作为对照药物的红霉素组，该组患儿CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10较治疗前并无统计学差异，且显著低于阿奇霉素，说明该药对此三项指标的改善并不明显，间接提示此三者可能不是阿奇霉素的靶性淋巴细胞。作为评价感染程度的指标，阿奇霉素及红霉素组患儿的PCT及MP-IgM在治疗后均显著低于治疗前，说明两药的均可降低支气管及肺泡内炎症，但结果提示治疗的PCT及MP-IgM以阿奇霉素组下降更为显著，说明阿奇霉素效果更好，该结果与朱庆龄[16]报道的具有一致性。

通过本研究笔者认为，CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者下降是MP感染相关性支气管肺炎患儿的重要免疫学特征，并且与PCT及MP-IgM呈显著相关性；阿奇霉素对提高CD8+CD28-T细胞含量及下调PCT及MP-IgM的效果均优于红霉素。

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