庞艳玲，孟德素

(菏泽学院化学化工系，山东菏泽，274015)

左氧氟沙星(LVFX)为化学合成的抗菌药，是第四代喹诺酮类药物，具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用安全等特点，是治疗泌尿、呼吸道、胃肠系统细菌感染性疾病的首选药物，目前测定分析方法主要是荧光法［1］、紫外分光光度法［2］、HPLC 法［3］、紫外吸收系数法［4］、紫外检测法［5］、毛细管电泳法［6］、高效液相色谱法［7～8］、一阶导数分光光度法［9］等。几年来，部分养殖户存在不合理甚至“滥用”左氧氟沙星的现象，由此形成了畜禽产品左氧氟沙星残留超标的安全隐患。

荷移反应是基于电子给体和电子受体之间的电荷转移形成荷移复合物的一类反应，由于荷移络合物的形成，使吸收光谱发生较大幅度红移，从而避开药物制剂或体液中其他物质的干扰，使其选择性显著提高。本文研究了左氧氟沙星与茜素的荷移反应，确定了最佳反应条件，并对反应机理进行了初步探讨。

1 仪器与试剂

TU-1810型紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限公司;红外光谱仪，傅里叶红外光谱仪-FTIR370;pHS-3型精密酸度计，上海雷磁仪器厂。

左氧氟沙星标准品，中国食品药品检定研究院含量97%;茜素，中国医药公司上海化学试剂采购供应站。

鸡肉，市购。所用试剂若无特别说明均为分析纯，试验用水为去离子水。

2 实验方法与结果

2.1 溶液配制

(1)茜素标准溶液溶液:准确称取茜素13.0 mg溶于无水乙醇中，并定容至100 mL。

(2)左氧氟沙星标准溶液:准确称取左氧氟沙星标准品10.3 mg，溶解并定容至100 mL。

(3)BR缓冲溶液的配制:在100 mL三酸混合液(磷酸、乙酸、硼酸，浓度均为0.04 mol/L)中，用0.2 mol/L NaOH溶液调至不同pH值的缓冲溶液。

(4)准确移取左氧氟沙星标准溶液2 mL于10 mL比色管中，加入1 mL茜素溶液并加水定容，摇匀后在室温下放置10 min，以同种方法配制试剂空白作参比，在532 nm处测其吸光度。

2.2 实验条件优化

2.2.1 吸收光谱

图1 左氧氟沙星(1)、茜素(2)和络合物(3)的可见吸收光谱图Fig.1 The Vis spectra of LVFX(1)，Alizarin(2)and complex(3)

按照试验方法配制溶液，在400～700 nm内分别扫描左氧氟沙星、茜素和配制溶液的吸收光谱(图1)。左氧氟沙星在可见光区没有吸收峰，茜素在435 nm处有最大吸收，左氧氟沙星和茜素生成的络合物在532 nm处有最大吸收，最大吸收发生红移且吸收强度增大。在532 nm处的吸光度与左氧氟沙星浓度成正比，据此拟定测定左氧氟沙星的分析方法，实验证明该方法可行。

2.2.2 反应时间的影响

按照试验方法配制溶液，在室温下分别反应10、20、30、40、50、60 min 后，在 532 nm 处测其吸光度，结果表明，络合物的吸光度不随时间变化而变化。

2.2.3 反应温度的影响

按照2.1(3)配制溶液，分别在20、25、30、35、40、45℃ 下保温10 min后，冷却至室温，并在532 nm处测其吸光度。结果表明，温度对络合物的吸光度影响不大，本实验选室温反应即可。

2.2.4 试剂用量的影响

按照2.1(3)配制溶液，只改变左氧氟沙星用量分别为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 时，测其吸光度。结果表明，LVFX用量为2 mL时反应可以完全进行。

2.2.5 酸碱度的影响

按照2.1(3)配制6份溶液，分别向其中加入不同pH的标准缓冲溶液，测其吸光度。结果表明，酸性和碱性溶液中吸光度降低，所以本实验采用中性环境。

2.2.6 溶剂的影响

按照2.1(3)配制溶液，分别用不同溶剂溶解茜素，测定溶液吸光度。结果表明，溶剂对络合物吸光度影响不大，考虑到实验成本和环境效应，所以本实验采用乙醇作溶剂。

2.2.7 溶剂比例的影响

按照2.1(3)配制溶液，分别改变水和乙醇的比例，测定溶液吸光度。结果表明，

溶剂比例对络合物吸光度影响不大，所以本实验采用加水定容即可。

2.2.8 方法重现性

按照2.1(3)配制6份溶液并测其吸光度。结果如表1所示。由表1可知，6次测定结果的RSD是1.35%。

表1 精密度的测定Table 1 The determination of precision

2.2 标准曲线的绘制

按照试验方法配制溶液，对测得数据进行统计，处理得回归方程为A=0.017 9c-0.011 3，相关系数是0.999 6，表观摩尔吸光系数ε=6.47×103L/(mol·cm)，左氧氟沙星在1～50 mg/L符合比尔定律。

2.3 荷移络合物组成及稳定常数的测定

利用等摩尔连续变换法测得左氧氟沙星与茜素作用生成的荷移络合物的组成比为1∶1，络合物表观稳定常数为2.85×105。

2.4 反应机理的探讨

用KBr压片法分别测左氧氟沙星标准品、茜素固体与络合物晶体的红外光谱。比较光谱图可知，左氧氟沙星哌嗪环上与—CH3相连的C-N伸缩振动峰由1 048.73 cm-1络合后移至1 079.39 cm-1，波数增大，强度也显著增大;4位酮基的振动峰由1 624.11 cm-1移至1619.17 cm-1，变化不大，其他特征峰位置和相对强度变化不大，表明电子给予体左氧氟沙星，是哌嗪环上与—CH3相连的N原子上的孤对电子发生了转移。而作为电子受体的茜素，振动峰由1 632.81 cm-1移至1 619.71 cm-1，波数减小;其他峰的位置和强度变化不大，表明电子接受体左氧氟沙星，是中间的对苯醌环接受了电子。

左氧氟沙星中的氮原子上有一对孤对电子可作为n-π电子给予体，茜素是一平面缺电子体系，可作为电子接受体，左氧氟沙星与茜素作用形成n-π电荷转移络合物。根据荷移络合物的组成和两种反应物的结构推断，此荷移反应的反应式为:

2.5 样品分析和回收率

2.5.1 样品的制备

市场随机购买鸡肉样品，绞碎混匀，准确称取混匀鸡肉组织1.0 g于5 mL离心管中，加入4 mL乙腈和0.04 mL乙酸，高速匀浆提取30s，提取液以5 000 r/min离心5 min，上清液转移至10 mL具塞比色管中，重复提取1次，合并提取液，加入2 mL正己烷涡旋震荡脱脂，弃去正己烷层，吸取下层清液，反复用正已烷脱脂至溶液澄清，经0.22 μm滤膜过滤后待测定。

2.5.2 样品含量的分析

用处理好的样品，对鸡肌肉组织中左氧氟沙星残留进行测定，未测出氧氟沙星。为考察方法的可行性，做加标回收试验。称取1.0 g混匀后的鸡肉组织，添加左氧氟沙星标准溶液进行回收率实验，分别添加相当于5.0、10.0、2 0.0 mg/kg 3个水平，涡旋混匀，余下操作同鸡肉样品制备。每个添加水平平行做6份，计算其回收率和精密度，结果见表2。

表2 左氧氟沙星在鸡肉中的回收率(n=6)Table 2 Recoveries of Lefx in chicken samples(n=6)

由表2可知，回收率在92.0% ～96.8%之间，相对标准偏差(RSD)小于5.6%，均符合药物残留分析的要求。在保证仪器检出限和回收率稳定的前提下，鸡肉组织中左氧氟沙星检测方法的检出限为1.0 mg/kg(按S/N=3计)。

3 结论

左氧氟沙星与茜素在水与乙醇的混合溶液中发生反应，生成络合物的最大吸收波长为532 nm;表观摩尔吸光系数是6.47×103L/mol·cm;药物浓度在1～50 mg/L内符合比耳定律。应用拟定的方法测定鸡肉组织中左氧氟沙星的含量，回收率在92.0%～96.8%，鸡肉组织中左氧氟沙星检测方法的检出限为1.0 mg/kg(按S/N=3计)。所用仪器简单，操作快速、简便，可用于鸡肉中左氧氟沙星含量的准确、快速测定。

［1］ 陈玉海，张彦青.荧光法研究左氧氟沙星与人血清蛋白作用机理及含量测定［J］.光谱实验室，2008，25(2):185-189.

［2］ SONG J J，LI Z F，LI J Q，et al.Content determination of levofloxzacin mesylate for injection by UV spectrophotometry［J］.China Pract Med(中国实用医药)，2010，5(27):54-55.

［3］ 蔡佳玉，孙树茂，孟永春，南开辉.HPLC测定微球中盐酸左氧氟沙星的含量［J］.中国应用现代医药学，2012，29(5):437-440.

［4］ 顾宜，张三奇.紫外吸收系数法测定左氧氟沙星注射液的含量［J］.第四军医大学学报，2002，23(9):157.

［5］ Das A，Mukherjee J，Dey G，et al.Bioequivalence study of levofloxacin tablets in healthy volunteers using HPLC［J］.Arzneimittelforschung，2011(1):61-65.

［6］ 林伟丰，康信煌.毛细管电泳法测定氧氟沙星及左氧氟沙星在其制剂中的含量［J］.中国抗生素杂志，2005，30(12):756-758.

［7］ 杨靖，龚林阁，陈青连.高效液相色谱法测定注射用盐酸左氧氟沙星的含量［J］.赤峰学院学报:科学教育版，2011，3(2):102-103.

［8］ 罗杨高效液相色谱法测定兽用氧氟沙星的含量［J］.分析仪器，2008(6):28-30.

［9］ 王玲，李淑云.一介导数光谱法测定氧氟沙星滴耳液含量［J］.中国医药指南，2011，9(6):195.