王 涛，刘跃华，郑和义，左亚刚，方 凯

中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院皮肤科，北京，100730)

*通信作者(corresponding author):yuehualiu@263．net

BCL-2基因是与细胞凋亡关系密切的原癌基因之一。BCL-2/IgH融合基因可导致BCL-2蛋白的过度表达，可能是淋巴瘤发病和发展的机制之一。既往有研究显示，BCL-2/IgH在淋巴瘤的辅助诊断、检测疗效、评估化疗、预防复发和评估预后等方面有重要的作用。紫外线光疗治疗蕈样肉芽肿(Mycosis Fungoides，MF)引起的BCL-2蛋白表达下降究竟是由于何种机制所致，目前并不清楚。有研究显示光疗后早期MF患者皮损组织中BCL-2蛋白表达显著下降。但有作者认为补骨脂联合紫外线A治疗(Psoralen plus Ultraviolet A，PUVA)治疗后MF皮损组织中BCL-2蛋白变化与临床和病理改变并不相关［1］。综上，针对光疗后MF组织中BCL-2变化的更深入的研究很有必要，检测BCL-2/IgH是否在MF患者体内高表达，甚至光疗前后其表达变化与否值得深究。

本研究采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测早期MF经紫外线光疗前后BCL-2/IgH融合基因出现的可能变化，探索此方法在评价光疗疗效和预后的可能性。

1 材料与方法

1.1 对象:24例早期MF患者经PUVA或NB-UVB及PUVA治疗缓解后联合NB-UVB等3种治疗前后48份皮损处石蜡包埋组织标本。

以正常人DNA模板为阴性对照，以β-actin为内参照，以预实验中阳性标本为阳性对照。

1.2 主要试剂盒及来源:FFPE DNA Kit(CW547，康为世纪公司);SYBR® Premix EX TaqTM和 ROX Reference Dye(×50)(TaKaRa)。

1.3 方法:用荧光定量PCR检测BCL-2/IgH融合基因。根据试剂盒说明配制PCR反应体系。1)荧光定量PCR反应体系(冰上配制，20μL)及引物序列，BCL-2/IgH引物序列按照文献报道［2］由生工生物工程(上海)有限公司合成，内参基因β-actin引物序列由赛百盛基因技术有限公司合成。……