薛建有，桑婷婷，戚武林，曹玲玲，毛群铨，朱晓芳，张世馥

目前已发现一些因子参与调控红系分化。GATA1是一个至关重要的造血转录因子，GATA1/FOG1复合体通过激活α-珠蛋白和EKLF基因的表达而抑制GATA2的表达来促进红系分化［1］。PU.1与GATA1的作用恰好相反，可阻碍红系分化。在HMBA或DMSO诱导分化的MEL细胞中GATA1表达上调而PU.1表达下调，GATA1的过表达导致MEL细胞红系分化，但这种GATA1的诱导作用可被PU.1的上调表达抑制［2］。PU.1与GATA1相结合导致GATA1级联信号通路的阻断而阻碍了红系分化进程。c-Myc在红系分化过程中表达下调，其过表达阻碍Rac2和组蛋白乙酰转移酶(HAT)Gcn5下调表达从而导致珠蛋白H3和H4乙酰化、阻碍了核固缩和排核［3］。真核生物翻译起始因子 4H(eIF4H)最早在兔子网织红细胞中发现，在eIF4B和eIF4F缺少的情况下可促进血红蛋白的合成［4］。然而eIF4H是否对白血病细胞增殖和红系分化的产生影响尚未见报道。为此，本研究通过构建eIF4H低表达的MEL细胞稳定株，通过观察eIF4H低表达对MEL细胞体外增殖和红系分化的影响，为进一步探究eIF4H在白血病发生中的作用机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 细胞和质粒

HEK293T细胞(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)，MEL细胞(中国协和医科大学基础医学研究所惠赠)。

载体质粒 pLKO.1、对照质粒 pLKO.1-TRC(scramble)、包装质粒pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2(Addgene公司)。

1.2 试剂

胎牛血清(Hyclone公司);MEN培养基和DMEM培养基(Gibco公司);嘌呤霉素、丁酸钠和MTT(Sigma公司);转染试剂 LipofectanineTM2000(Invitrogen公司);PI凋亡染色试剂盒(南京凯基生物);兔抗小鼠eIF4H单克隆抗体(CST公司);小鼠抗人β-actin单克隆抗体和羊抗小鼠 IgG单克隆抗体(Sigma公司)。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养:MEL和HEK29T细胞培养于含10%FBS的DMEM培养液(100 U/mL青霉素和100μg/mL链霉素)中，于37℃、5%CO2饱和湿度下培养，每隔2 d传代1次，取对数生长期细胞用于实验。……