张建波，王莉莉，张媛媛，李文全

(1青州市人民医院，山东青州262500;2益都中心医院)

甘露糖高表达是肿瘤细胞的重要特征之一，目前临床已将甘露糖作为肿瘤治疗的一个重要靶点。甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂(PA-MSHA)为一种新型免疫抑制剂，研究发现其能与甘露糖发生特异性结合并作用于肿瘤细胞［1］，对诱导肝癌细胞凋亡和抑制其转移具有明显优势但其对于肝癌细胞增殖及细胞周期的影响报道较少。2013年5～12月，我们观察了PA-MSHA对肝癌细胞增殖的影响，现分析结果并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人肝癌细胞株HepG2、MHCC97L(复旦大学研究所所提供)。DMEM培养基(北京索莱宝科技有限公司提供)，BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海酶联生物科技有限公司提供)，免疫人Cyclin D1、PCNA和CDK2以及p21与p27单克隆抗体(美国 Neomarkers公司提供)，甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂(北京万特尔生物制药有限公司提供)，FACSCalibur流式细胞仪器(美国BD公司提供)、FR-200A全自动紫外装置(上海惠亿生物科技有限公司提供)。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养及干预 选取肝癌细胞株 MHCC97L及HepG2分别于DMEM培养基中37℃、5%CO2条件下培养孵育，每隔3天更换1次培养基;在0.25%胰酶—乙二胺四乙酸消化后予1∶3传代处理［2］。细胞传代过夜、贴壁进入对数生长期后选取96孔板，每个孔板中加入100.0 μL的2 000个细胞。MHCC97L及HepG2均随机分为对照组及观察1组、观察2组和观察3组。对照组不干预，观察1组予1.0×108/mL的PA-MSHA处理，观察2组予2.0×108/mL的PA-MSHA处理，观察3组予2.0×108/mL的PA-MSHA+100 mmol/L的甘露糖处理。

1.2.2 观察项目

1.2.2.1 细胞增殖率 采取 MTT法。HepG2和MHCC97L干预后孵育培养48 h，每孔加入10.0 μL的 CCK-8 溶液;分别于干预1、2、3、4、5、6 h 测定450 nm处吸光度值，计算细胞增殖率［3］。……