齐艳霞，康世均，刘新会，罗荣城

(南方医科大学中西医结合医院，广州510315)

恶性黑色素瘤(Malignant Melanoma，MM)为恶性程度较高的肿瘤，该病起病隐匿，易转移且病死率高，治疗棘手。研究发现，Notch信号通路不仅对正常细胞的分化起作用，而且可影响肿瘤细胞的增殖、分化及凋亡。Notch1是Notch的4个受体之一，近年来证实其间接参与了黑色素细胞的早期恶变［1］。RNA干扰是由双链RNA引发的诱导转录后基因沉默的过程，能特异性抑制与肿瘤发生发展相关的基因表达。目前靶向Notch1基因小干扰RNA(Notch1 siRNA，以下简称siNotch1)，抑制肿瘤细胞生长的作用已在胶质瘤、肾癌、宫颈癌等疾病的研究中得到了证实［2～4］。2013年4～11月，我们观察了对小鼠MM细胞体内外生长的抑制作用。现分析结果，探讨siNotch1治疗MM的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料 实验动物:C57BL/6小鼠，雌性，6～8周龄，体质量18～22 g，购自南方医科大学动物实验中心，SPF级环境中饲养;细胞系:小鼠MM细胞株B16F1由美国芝加哥大学孟玉茹教授赠与;主要试剂:PrimeScript®RT reagent试剂盒、SYBR®Premix Ex TaqTM试剂盒购自TaKaRa公司;Notch1及β-actin抗体购自 Santa Cruz公司;Trizol、Lipofectamine2000、Notch1及β-actin引物购自Invitrogen公司;PVDF膜和化学发光液购自 Pierce公司;胎牛血清、高糖DMEM培养基购自美国HyClone公司;siNotch1 Oligo及阴性对照购自上海吉玛生物公司;HRP标记的兔抗山羊二抗试剂盒(PV-9003)购自北京中衫金桥生物公司;MTT试剂盒、DMSO购自Sigma公司。

1.2 体外实验

1.2.1 细胞培养 B16F1细胞株用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液培养，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱内，倒置显微镜下观察细胞生长情况，每2～3 d传代一次。

1.2.2 siNotch1的设计与合成 siNotch1的设计合成由上海吉玛生物公司完成，前期从预先设计的6对序列中选……