侯吉锋，姚星宇，张国华，赵鹏伟，杨丽敏

(内蒙古医科大学附属医院，呼和浩特010059)

研究发现，脐带中含有丰富的造血及间充质干细胞(MSCs)。神经巢蛋白(nestin)是一种中等纤维蛋白，在哺乳动物神经前体细胞中高表达，是神经前体细胞的标志分子，目前已有关于经定向诱导的脐带间充质干细胞(UC-MSCs)表达神经细胞特有抗原或相关因子的研究报道［1，2］。为探讨未经诱导的脐带MSCs中是否存在神经前体细胞标志物基因表达及其意义，我们于2013年5～12月进行了如下研究。

1 材料与方法

1.1 材料 根据中华人民共和国国务院颁发的《医疗机构管理条例》，经本院伦理委员会批准，实验前告知对方实验方案及风险，产妇家属签署自愿捐献脐带志愿书后，由妇产科医师采集10名健康足月儿的脐带(产妇均无传染病)主要试剂及设备:DMEM/F12(美国GIBCO)，胎牛血清(美国GIBCO)，双抗(青霉素+链霉素，美国GIBCO公司)，台盼蓝(Sigma)，PBS(天津化学试剂厂)，倒置相差显微镜(Olympus)，荧光显微镜(Nikon)，高速离心机(RJ-TGL-16B)，层流超净工作台(YJ-1450苏州净化设备厂)，CO2细胞培养箱(日立)，0.22 μm 微孔滤膜滤器(美国 Millipore)，25 cm2细胞培养瓶(美国Lincoln)。nestin mRNA引物，由TaKaRa公司提供。

1.2 实验方法

1.2.1 脐带MSCs分离、培养及鉴定 取无菌新鲜脐带标本3 cm，以PBS(pH7.4)反洗清洗并冲洗多次，抽掉血管，剪碎脐带组织，以胶原酶37℃消化2 h，2 500 r/min 离心 10 min，取下层沉淀，以 0.25%胰蛋白酶37℃消化20 min，2 500 r/min离心10 min，取沉淀部分，以PBS吹打使悬浮，100 μm的滤网进行过滤，收集滤过液以2 000 r/min离心10 min，取沉淀部分，以PBS洗涤细胞3遍，每遍1 000 r/min离心 10 min，以 1×105/L的密度接种于DMEM培养基(培养体系为DMEM/F12+10%胎牛血清+双抗)中，置于37℃、5%CO2和100%湿度培……