STAT3信号通路与乳腺癌紫杉醇耐药相关

2014-11-27司方莹李朵璐阚全程

基础医学与临床 2014年7期

关键词：紫杉醇耐药乳腺癌

司方莹，李朵璐，阚全程

(郑州大学第一附属医院药剂科，河南郑州 450052)

STAT3信号通路与乳腺癌紫杉醇耐药相关

司方莹，李朵璐，阚全程*

(郑州大学第一附属医院药剂科，河南郑州 450052)

信号传导和转录激活子3(STAT3)是一种存在于胞质的双功能蛋白，其在肿瘤的异常增殖和恶性转化中起关键作用[1]。目前研究表明：STAT3信号通路可能与肿瘤细胞化疗耐药相关。本研究探讨STAT3信号通路与乳腺癌紫杉醇耐药相关，以期将分子治疗与传统化疗有效结合。

1 材料与方法

1.1 材料:紫杉醇(双鹭药业有限公司)；STAT3及pSTAT3第一抗体、IRDye 680LT标记的山羊抗兔IgG、鼠抗人Actin一抗和IRDye 800CW标记的山羊抗鼠IgG(本实验室保存)；STAT3-siRNA正义链：5′-GGUACAUCAUGGGCUUUAUTT-3′，反义链：5′-AUAAAGCCCAUGAUGUACCTT-3′；无义对照siRNA正义链：5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，反义链：5′-AC GUGACACGUUCGGAGAATT-3′，上海吉玛制药有限公司合成。

1.2 细胞培养:人紫杉醇敏感和耐药乳腺癌细胞系：Mcf-7和Mcf-7/TR(本实验室保存)。细胞培养于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的RPMI1640完全培养基中，37 ℃，饱和湿度、5% CO2的细胞培养箱中培养。

1.3 siRNA转染:将Mcf-7/TR细胞接种于6孔板，细胞汇合度为60%～80%时进行siRNA转染，将细胞分为3组：空白对照组,非特异性siRNA转染组,STAT3-siRNA转染组。按照Lipofectamine RNAiMAX操作说明书进行细胞转染，siRNA终浓度为30 nmol/L，转染后72 h收获细胞。每组设2个复孔，重复3次实验。

1.4 MTT法检测细胞的增殖活性:取对数增殖期细胞，5 000个/孔接种于96孔板，分为Mcf-7组、Mcf-7/TR组、STAT3-siRNA转染的Mcf-7组及STAT3-siRNA转染的Mcf-7/TR组,共4组，100 μL/孔，过夜培养。转染24 h后，每孔加入0.001、0.01、0.05、0.25 μmol/L的紫杉醇，72 h后，加入MTT 20 μL(5 g/L)，孵育4 h，加入DMSO，200 μL/孔，振荡10 min，酶标仪在570 nm检测波长下测定A值。细胞抑制率(%)=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。计算半数抑制浓度IC50。