马霞++张国祖++郭振环

摘要：观察了黄连解毒散超微粉对人工诱发鸡大肠杆菌病的治疗效果。通过人工诱发建立鸡大肠杆菌病模型，用黄连解毒散超微粉进行治疗，同时设黄连解毒散散剂对照和氟苯尼考西药对照，观察临床症状、体质量变化及血清超氧化物歧化酶活性和内毒素含量变化。结果表明，黄连解毒散超微粉、黄连解毒散散剂和西药氟苯尼考的治愈率和有效率差异不显著；黄连解毒散超微粉和黄连解毒散散剂降低血清内毒素含量，提高超氧化物歧化酶活性，增加体质量的作用显著优于西药氟苯尼考。黄连解毒散超微粉对人工鸡大肠杆菌病有很好的疗效，与其散剂比较，使用剂量可以节省一半。

关键词：黄连解毒散；超微粉；鸡；大肠杆菌病；疗效；剂量

中图分类号： S858.315.1+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）10-0204-03

收稿日期：2013-12-21

基金项目：河南省重点科技攻关项目（编号：122102110185、122102110224）；河南省科技成果转化项目（编号：132201310002）。

作者简介：马霞（1978—），女，山东泰安人，博士，讲师，主要从事中兽药新制剂研究。 E-mail：maxia801010@126.com。鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率很高，不同品种不同日龄的鸡均可发病，给养鸡业造成极大的损失[1-3]。抗菌药对该病虽有一定的治疗和预防作用，但由于其反复和大量应用，极易产生抗药性，而且易造成药物残留影响食品安全[4]。中药具有疗效可靠、毒副作用小、不易产生有害残留等优势[5]，河南省康星药业股份有限公司研制开发了黄连解毒散超微粉，本试验通过人工诱发鸡大肠杆菌病，然后用黄连解毒散超微粉进行治疗，旨在确认该药对鸡大肠杆菌病的疗效，为临床应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验药物

黄连解毒散超微粉，河南省康星药业有限公司制备，规格：100 g；批号：11110502；黄连解毒散，河南省康星药业股份有限公司产品，规格：每袋100 g；批号：12060101；氟苯尼考粉，河南省康星药业有限公司产品，规格：100 g ∶10 g；批号：11110101。

1.2检测试剂

内毒素和超氧化物歧化酶ELISA检测试剂盒，R&D Systems Inc.，Minneapolis公司产品，批号分别为12-03和12-01。

1.3主要仪器

酶标仪，离心机，超净工作台，分析天平，恒温摇床等。

1.4攻毒菌种与人工发病预试验

鸡大肠杆菌O78株（C83890），购自中国兽药监察所。

菌种复活与鉴定：先将菌种接种到GN增菌液中，放置 37 ℃ 恒温摇床（180 r/min）培养8 h，然后无菌操作接种于麦康凯琼脂平板上，37 ℃培养16 h，呈边缘整齐、光滑、隆起的红色菌落。从麦康凯琼脂培养基上挑取单个的菌落用革兰氏染色后，在油镜下观察，有许多短杆状、单个散落的红色细菌。

菌种培养：挑取经鉴定过的单个菌落接种于GN增菌液中，放置37 ℃恒温摇床（180 r/min）培养8 h。然后无菌操作接种于麦康凯琼脂平板上，37 ℃培养16 h。4 ℃冰箱保存备用。

攻毒预试：挑取麦康凯琼脂平板上单个菌落于GN增菌液中放置37 ℃恒温摇床（180 r/min）培养8 h。用麦氏比浊法调整菌液浓度为1×107 CFU/mL、1×108 CFU/mL、1×109 CFU/mL、1×1010 CFU/mL和1×1011 CFU/mL；取60日龄罗曼蛋公鸡180羽随机均分为6组，每组30羽。空白对照组隔离饲养并胸肌注射0.5 mL GN增菌液。其余5组，分别用稀释的大肠杆菌菌液胸肌注射0.5mL攻毒。各组死亡率在0～100%之间（表1），因正式试验时需要观察用药效果，死亡率太高不利于观察用药效果，死亡率太低又不利于比较不同剂量的药物治疗效果，所以选择1×109 CFU/mL菌液浓度（死亡率为36.7%）为正式试验的攻毒菌液浓度。

2结果

2.1总体疗效

2.4试验前后体质量变化

在试验开始时，各组间体质量差异不显著（P>0.05）。 在试验结束时（28 d），各攻毒组体质量显著低于空白对照组，黄连解毒散超微粉组和黄连解毒散散剂对照组间的体质量差异不显著（P>0.05），但显著高于西药对照组，西药对照组显著高于阳性对照组（P<0.05） （表6）。

表6各组体质量的变化

组别体质量（g/羽）0 d28 d黄连解毒散超微粉组875±30a1 137±35b黄连解毒散散剂对照875±25a1 140±39b西药氟苯尼考对照868±27a1 080±33c阳性对照861±26a995±37d空白对照867±28a1 255±38a注：同列数据后标不同字母者差异显著（P<0.05）。

3讨论

本试验结果显示，黄连解毒散超微粉组、黄连解毒散散剂对照组和西药对照组的治愈率和有效率差异不显著，但显著高于阳性对照组；黄连解毒散超微粉和黄连解毒散散剂降低血清内毒素含量、提高超氧化物歧化酶浓度、增加体质量作用的效果差异不显著，但显著优于西药对照组。表明，黄连解毒散超微粉对鸡大肠杆菌病有较好的疗效，与其粉散剂比较，达到治疗等效的使用剂量可以减少一半。

黄连解毒散为《中华人民共和国兽药典》2010版二部中收录方剂，由黄连、黄芩、黄柏、栀子四味中药组方而成。具有泻火解毒之功效。主治三焦实热，疮黄肿毒。方中黄连泻上焦心火兼泻中焦火，为君药；黄芩泻上焦肺火，为臣药；黄柏泻下焦肾火，为佐药；栀子通泻三焦之火，导热下行从膀胱而出，为使药[8]。孙守芳采用给家兔静脉注射大肠杆菌内毒素的方法成功复制中医温病气分证模型，该气分证阶段是温病卫气营血传变过程中期阶段，此时正盛邪实，正邪相争激烈，三焦壮热。用白虎汤、黄连解毒散等清寒方剂进行治疗，取得了很好的效果，并且发现清寒方剂具有清除气分证模型家兔血清内毒素和提高超氧化物歧化酶浓度的作用[9]。

本试验中我们用大肠杆菌攻毒雏鸡后，雏鸡表现为病鸡精神沉郁，羽毛松乱，食欲不振，呼吸困难，喘气，呼吸锣音，张口伸颈，拉黄白色稀粪。剖检变化为，肝脏肿大，有时见到淡黄色坏死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黄白色，易剥脱。心包增厚不透明，心包积有淡黄色液体；气囊炎也是常见的变化，胸、腹等气囊囊壁增厚呈灰黄色。病程经历气分证阶段，最后至营血分证而死亡。应用黄连解毒散进行治疗就是对三焦实热的气分证进行对证治疗，把好气分关，防止传入营血分而导致雏鸡更多死亡。

超微粉碎拔术是20世纪70年代为适应高科技的发展而形成的一种新技术，在发达国家被广泛应用于冶金、食品、医药、化妆品、航天航空等国民经济部门及军事领域。中药超微粉碎技术又称中药细胞级粉碎技术，通过超微粉碎，中药材的颗粒从传统工艺的60目左右提高到300目以上，粉碎后中药粒子的中心粒径在5～10 μm。这项新技术应用于不同质地的中药材，通过细胞破壁打破了细胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出来，从而使药物起效更加迅速、充分[10-11]。本试验结果表明，1%剂量黄连解毒散超微粉与2%剂量黄连解毒散散剂对人工攻毒模型鸡大肠杆菌病的治疗效果差异不显著，这意味着黄连解毒散经超微粉碎后用于疾病防治可以节省一半的用药量。

参考文献：

[1]程汉，胡新岗，曹军平. 鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验[J]. 江苏农业科学，2013，41（3）：172-174.

[2]樊琛，曾庆华，王会，等. 鸡大肠埃希菌s1菌株iss基因的序列[J]. 江苏农业科学，2013，41（9）：15-16.

[3]孟志敏，牛小飞，李连缺，等. 甲砜霉素可溶性粉对人工感染鸡大肠杆菌病的药效学研究[J]. 湖北农业科学，2012，51（1）：120-122.

[4]周军，李红斌，李睿鸿. 滥用抗生素对养猪业的危害及应对措施[J]. 当代畜禽养殖业，2011（6）：44-47.

[5]温伟，吕金良，高振伟，等. 浅谈现代中兽药的发展前景[J]. 四川畜牧兽医，2009，36（12）：12-14.

[6]王效田，孔祥峰，夏明龙，等. 南京郊区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J]. 畜牧与兽医，2004，36（11）：6-8.

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[9]孙守芳. 解毒白虎汤治疗温病气分证的实验研究[D]. 福州：福建中医学院，2004.

[10]陈永忠，夏业才. 超微粉碎技术在中兽药方面的应用及展望[J]. 中国兽药杂志，2010，44（6）：36-38.

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本试验中我们用大肠杆菌攻毒雏鸡后，雏鸡表现为病鸡精神沉郁，羽毛松乱，食欲不振，呼吸困难，喘气，呼吸锣音，张口伸颈，拉黄白色稀粪。剖检变化为，肝脏肿大，有时见到淡黄色坏死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黄白色，易剥脱。心包增厚不透明，心包积有淡黄色液体；气囊炎也是常见的变化，胸、腹等气囊囊壁增厚呈灰黄色。病程经历气分证阶段，最后至营血分证而死亡。应用黄连解毒散进行治疗就是对三焦实热的气分证进行对证治疗，把好气分关，防止传入营血分而导致雏鸡更多死亡。

超微粉碎拔术是20世纪70年代为适应高科技的发展而形成的一种新技术，在发达国家被广泛应用于冶金、食品、医药、化妆品、航天航空等国民经济部门及军事领域。中药超微粉碎技术又称中药细胞级粉碎技术，通过超微粉碎，中药材的颗粒从传统工艺的60目左右提高到300目以上，粉碎后中药粒子的中心粒径在5～10 μm。这项新技术应用于不同质地的中药材，通过细胞破壁打破了细胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出来，从而使药物起效更加迅速、充分[10-11]。本试验结果表明，1%剂量黄连解毒散超微粉与2%剂量黄连解毒散散剂对人工攻毒模型鸡大肠杆菌病的治疗效果差异不显著，这意味着黄连解毒散经超微粉碎后用于疾病防治可以节省一半的用药量。

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超微粉碎拔术是20世纪70年代为适应高科技的发展而形成的一种新技术，在发达国家被广泛应用于冶金、食品、医药、化妆品、航天航空等国民经济部门及军事领域。中药超微粉碎技术又称中药细胞级粉碎技术，通过超微粉碎，中药材的颗粒从传统工艺的60目左右提高到300目以上，粉碎后中药粒子的中心粒径在5～10 μm。这项新技术应用于不同质地的中药材，通过细胞破壁打破了细胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出来，从而使药物起效更加迅速、充分[10-11]。本试验结果表明，1%剂量黄连解毒散超微粉与2%剂量黄连解毒散散剂对人工攻毒模型鸡大肠杆菌病的治疗效果差异不显著，这意味着黄连解毒散经超微粉碎后用于疾病防治可以节省一半的用药量。

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