孙钰航++刘艳杰++李海涛++高继国

摘要：QWH132、QZL1-2、QWH 7-2、QZL144-1、QZL144-2、QWH101是笔者所在实验室从辽宁千山地区自行分离的含有cry8类基因的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis），具有鞘翅目杀虫活性。本研究在6株菌株中成功发现并克隆了6个靶标生物为鞘翅目的cry8类基因，其中被鉴定为cry8C类、cry8D类、cry8F类（大小为3 525 bp）、cry8K类的基因各有1个，被鉴定为cry8E类的基因有2个，其大小分别为3 534、3 495 bp。后4个基因已在GenBank注册，登记号依次为KC778983、KC778983、KC778984、KC778985。将6个基因插入pEB表达载体，经过PCR检测与 SDS-PAGE 分析证实它们能在大肠杆菌中进行异源表达，这6个基因的表达约有126～128 ku的蛋白，这些菌株中的Cry8蛋白为进一步发掘我国天然的苏云金芽孢杆菌资源与构建新的杀鞘翅目昆虫的高效工程菌提供了重要的试验材料与新思路。

关键词：苏云金芽孢杆菌；大肠杆菌；质粒；cry8基因；克隆；表达；生物信息学分析

中图分类号：Q785文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）10-0028-04

收稿日期：2014-01-07

基金项目：国家“863”计划（编号：2011AA10A203、2010RCB54）。

作者简介：孙钰航（1984—），男，黑龙江牡丹人，硕士研究生，研究方向为生物化学与分子生物学。E-mail：weiweiabcd222@163.com。

通信作者：高继国，教授，博士生导师，研究方向为生物化学与分子生物学。E-mail：gaojiguo1961@hotmail.com。苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）是目前应用最多也是应用最广泛的生物杀虫剂。它是天然的昆虫病原菌，对无脊椎动物中的4个门（包括节肢动物门中的16个目的3 000种以上）的害虫有活性[1]，而对非目标生物安全，从而广泛用于防治鳞翅目（Lepidoptera）、双翅目（Diptera）、鞘翅目（Coleoptera）等农林害虫[2]。苏云金芽孢杆菌能够产生多种杀虫活性物质，其中主要有Cry蛋白、Vip蛋白、Sip蛋白，其中对Cry蛋白与Vip蛋白的研究较深入[3]。……