杨滋渊 杨玲玲 陕西省人民医院（西安710068）

△商洛学院（商洛721000）

红鹿补肾胶囊由黄芪、红参、淫羊藿等16味药材组成，具有益气养血，温肾壮阳等功效。临床用于治疗面色白，精神疲乏，四肢少温，小便清长，舌淡苔薄白，脉沉细弱等症。方中黄芪、淫羊藿等9味药材作为水提工艺的主要药材，淫羊藿中的淫羊藿苷［1］作为淫羊藿的指标性成分。为了有效地控制该工艺，我们通过正交试验，采用高效液相色谱法［2］测定淫羊藿苷的含量［3］，结合干浸膏得率两项指标，确定最佳工艺。

1 仪器与试药1.1 仪器日本岛津LC－2010A高效液相色谱仪；BS210S型电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）d＝0.1mg；BT25S型电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）d＝0.01mg；LXJ－Ⅱ型台式离心沉淀机（南京第一医疗器械厂）；DK－98－ⅡA型水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；UP3200H型超声波清洗器（熊猫集团南京电子计量有限公司）；MH－2000调温型电热套（北京科伟永兴仪器有限公司）；JS15－1型电子天平（上海浦春计量仪器有限公司）d＝1g；CS101－3EB型电热鼓风干燥箱（重庆四达试验设备有限公司）；FW177型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；HC·TP 11B－10型架盘药物天平（北京医用天平厂）最小和最大质量1g－1000g。

1.2 试药 淫羊藿苷对照品购于中国药品生物制品鉴定所（批号：110737－200415）；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

2 方法与结果2.1 检测方法 2.1.1 干浸膏得率的测定 精密量取离心滤过后的滤液100mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，至烘箱于105℃干燥3h，置干燥器中冷却0.5h，迅速称重，计算干浸膏得率。

2.1.2 淫羊藿苷含量测定［4］供试品溶液的制备 按淫羊藿药材0.2g量计，精密量取离心滤过后的滤液适量，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用稀乙醇20mL转移至具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品3.95mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1mL含淫羊藿苷0.158mg的溶液，即得。

色谱条件与系统适应性试验 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（30：70）；检测波长：270nm；流速：1.0mL。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。

含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，结果见表2。

2.2 正交试验 2.2.1 实验因素和水平设定 影响水提取的主要因素有加水量、提取时间和提取次数，因此我们选择正交实验进行设计研究。为了系统考察水提取的工艺参数，我们设计的因素水平表见表1。

表1 试验因素水平表

2.2.2 正交试验安排及结果：见表2－3。

由表2K及R值可知，以干浸膏得率为考察指标A3＞A2＞A1，B2＞B3＞B1，C3＞C2＞C1，C因素影响最大，A、B因素次之。结合表3干浸膏得率方差分析知，各因素作用主次为C＞A＞B，其中C因素影响极显著，A、B因素次之，因此水煎煮最佳提取工艺为A3 B2C3。由表2K及R值可知，以淫羊藿苷得量为考察指标时，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，C因素影响最大，A、B因素次之。结合表3淫羊藿苷得量方差分析知，各因素作用主次为C＞B＞A，其中C因素影响较显著，A、B因素次之，水煎煮最佳提取工艺为A3B3C3，从两项考察指标结果看，煎煮时间略有不同，为了考虑到含量这一重要指标，故确定最佳工艺为A3B3C3。

表2 红鹿补肾胶囊L9（34）正交试验结果

表3 干浸膏得率及淫羊藿苷得量方差分析

表4 验证试验结果

2.2.3 验证试验：由于优选的工艺不包括在正交表的9次试验中，故对其进行了验证试验。用同一批药材，按汤剂处方量比例，称取炙黄芪30g，菟丝子、熟地、黄精、枸杞子各12g，韭菜籽9g，淫羊藿10g，五味子、甘草各6g共计109g，平行三份，按照优选的A3B3C3提取参数进行试验，测定干浸膏得率及淫羊藿苷含量，结果见表4。

由表4可见，以干浸膏得率和淫羊藿苷得量为评价指标，数据较稳定，且干膏得率和含量均较高。故确定A3B3C3为最佳工艺，即药材加水煎煮3次，每次12倍量，煎煮2h。

3 讨 论本实验研究黄芪、淫羊藿的水提取工艺，因其主要成分为淫羊藿苷，固本实验以干膏率及淫羊藿苷为考察指标，通过正交试验结合方差分析结果表明，水提影响干膏得率的主要因素是煎煮次数，加水量和煎煮时间影响较小。水提影响淫羊藿苷得率的主因素也是煎煮次数。最佳提取工艺为加水12倍量，煎煮3次，每次2h，所得的浸膏得率和淫羊藿苷含量均较高。

［1］谭 鹏，仲玲利，杨 蕾，等.不同炮制方法巫山淫羊藿中3个黄酮类成分油水分配系数的比较.药物分析杂志［J］.2013，33（8）：1289.

［2］佟 杰.高效液相色谱法测定仙灵骨葆丸中淫羊藿苷的含量［J］.当代医学，2010，16（32）：139.

［3］国家药典委员会编，中华人民共和国药典2010年版：一部［M］.中国医药科技出版社.

［4］梁 颖，孙思雨，刘 芳，等.高效液相色谱法测定复方中药强骨片中淫羊藿苷含量［J］.制剂与技术，2013，3（2）；52－70.