刘春景 白 荣 宋继荣 董晶晶 王学涵 马 艳

新疆医科大学第五附属医院风湿科(乌鲁木齐830011)

△新疆医科大学研究生院(830054)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是以关节对称性滑膜炎、骨侵蚀为特征自身免疫性疾病。其发病原因未明，抗原特异性T细胞的激活始终被认为是RA发病起始和进展的中心环节［1］。细胞、细胞是T细胞重要的亚群，尤其是细胞的亢进可以通过分泌炎性细胞因子致病、细胞和抗原提呈细胞相互作用导致RA发病是近年的共识，并且认为CD4+T细胞参与关节炎症反应的多个方面。有人认为关节炎模型鼠外周血CD4+T异常增殖，导致细胞比例失衡，因此纠正失衡是RA治疗药物的治疗机制之一［2］。蓬草除痹汤(PCCB)是由新疆地道中药骆驼蓬草及独活等十余味中药组成的，具有补益肝肾，滋养气血，散寒祛瘀通络之功效，初步研究表明其具有抑制RA模型大鼠关节中核因子κB受体活化因子配体和血清细胞因子的作用［3］，为了进一步探讨PCCB治疗RA的免疫调节作用机制，采用流式细胞技术，观察其对CIA大鼠外周血CD4+T细胞、细胞及T表达的影响，现报道如下。

1 材 料1.1 实验动物 Wistar大鼠由新疆维吾尔自治区动物研究疾病控制中心提供。选择55只清洁级，雌雄各半，体重112.43 ±20.2g。

1.2 实验药品 中药饮片购自新疆医科大学第五附属医院药剂科。PCCB组方:桑寄生、续断、独活、黄芪各15g，当归、补骨脂各12g，骆驼篷草、炒麦芽、甘草各9g等。上药煎药室加工，水煎抽滤除渣、水溶蒸发浓缩，浓度为含生药1.95g/mL;雷公藤多甙片上海复旦复华药业有限公司生产，批号为:Z31020415，配制浓度为 0.575g/mL。

1.3 试剂 牛Ⅱ型胶原蛋白、弗氏不完全佐剂Sigma公司产品;冰醋酸为天津市致远化学试剂有限公司生产;单克隆抗体CD3、CD8、CD4均为联科生物技术有限公司产品;溶血素为Beckman公司产品。

1.4 主要仪器 流式细胞仪，仪器型号:BD公司FACSCalibur。

2 方 法2.1 CIA大鼠模型制作及分组 实验大鼠适应性喂养2w后，随机抽出10只作为空白组，其余45只复制胶原诱导性关节炎(CIA)模型，取牛Ⅱ型胶原蛋白和冰醋酸与弗氏佐剂混匀成乳液，在大鼠右足垫注射，按0.1mL/只的剂量。于第8d，再次在大鼠尾根部注射乳液，空白组在相同部位注射等量生理盐水。按照AI＞5分为造模成功的标准，造模成功率为93.3%。将造模成功的42只大鼠随机分为模型组、PCCB组、对照药物雷公藤多甙组。

2.2 给药方法及途径 实验各组均为灌胃给药，PCCB组给予相当于生药19.5g/kg-1，雷公藤组给予雷公藤多甙片混悬液5.75g/kg;模型组和空白组给予生理盐水，每日给药1次，连续给药28d。

2.3 取材 各组大鼠经灌胃28d后，麻醉经腹主动脉采血，用抗凝管保存。

2.4 CD4+T、CD8+T指标检测 抗凝血2h内用流式细胞仪分析。

2.5 大鼠的AI测量 按大鼠多发性关节炎5级评分记录法:0级:无红肿:1级:小趾关节稍肿;2级:趾关节和趾跖肿胀;3级:踝关节以下的足爪肿胀;4级:包括踝关节在内全部足爪肿胀进行评分。每周评价1次。

2.6 统计方法 采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。实验数据以均数±标准差(±s)表示，进行多组间方差分析，以P ＜0.05为差异有统计学意义。

3 结 果3.1 大鼠AI的变化 计算各大鼠AI的平均值与对照组比较、造模后7、14d各组大鼠的AI无明显差异;治疗4周后，PCCB组大鼠的AI较模型组显著下降(P ＜0.01)。

表1 各组大鼠AI的变化(±s)

表1 各组大鼠AI的变化(±s)

注:与模型组比较:PCCB组与模型组比较●P ＜0.01，PCCB组与雷公藤组比较:◇P ＜0.05。

分组 动物(只)给药0周 给药1周 给药2周 给药3周 给药4周.13 ±1.36 PCCB 组 10 8.11 ±0.93 8.11 ±1.67◇ 6.89 ±0.78 5.33 ±0.71 3.56 ±1.13●◇雷公藤组 10 8.00 ±0.12 8.22 ±0.83◇ 7.00 ±0.71 6.33 ±1.00 4.78 ±0.83模型组 10 8.0 ±0.76 9.13 ±0.84 10.88 ±1.46 9.63 ±1.41 8●

表2 蓬草除痹汤对CD4+T细胞、细胞及 的影响(±s)

表2 蓬草除痹汤对CD4+T细胞、细胞及 的影响(±s)

注:与空白组比较:◆P ＜0.01;与模型组比较:△P ＜0.05，▲P ＜0.01。

组 别 动物(只)CD4+T细胞 CD8+T细胞 CD4+T/CD8+T 10 43.66 ±8.67 15.52 ±2.81 2.86 ±0.55模型组 10 53.24±5.96● 10.86±1.11● 4.96±0.84●PCCB 组 10 45.60 ±6.79△ 14.07 ±3.26△ 3.37 ±0.67▲雷公藤组 10 45.45±5.90△ 16.71±4.34▲ 2.90±0.87空白组▲

4 讨 论RA属中医“痹证”等范畴，先天禀赋不足，正气虚损，风寒湿热邪气侵袭，痹阻经络、肌肉、骨节，影响气血运行为基本病因病机，痹症日久多夹杂痰瘀互结，其重者内舍于脏。虚实夹杂、肝肾亏虚、气血不足为本病的特点。PCCB由十余味中草药组成，其中骆驼蓬草具有主治风湿、坚固筋骨、散寒除湿，治疗骨刺疼痛等作用［4］，整方配伍具有祛寒化瘀、益肝补肾、滋养气虚、健脾和胃之功效。

［1］李巧霞，丛 斌，单保恩.T细胞与类风湿性关节炎［J］.国际免疫学杂志，2011，34(1):1-5.

［2］易剑峰，易少波，雷波.双氢青蒿素对AA大鼠外周血T淋巴细胞的调节作用［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(18):203-205.

［3］刘春景，田新玮，王学涵，等.蓬草除痹汤干预类风湿性关节炎大鼠骨吸收骨重建及细胞因子的表达［J］.中国组织工程研究，2012，16(24):4499-4504.

［4］新疆人民出版社.新疆中草药［M］.新疆人民出版社，1975:66.

［5］刘春芳，林 娜.雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠免疫功能的影响［J］.中国中医药信息杂志，2004，11(7):602-604.

［6］高志芬，陈晓玲.类风湿关节炎患者CD4+T、CD8+T细胞及免疫球蛋白的检测及分析［J］.国际检验医学杂志，2008，29(11):1046-1047.

［7］肖 镇，刘彩霞，王 勇，等.类风湿关节炎病人外周血T细胞亚群的表达及意义［J］.内蒙古医学院学报，2008，30(1):1-5.