陈美霓+郭巍（等）

[摘要] 目的 观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。 方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响；荧光显微镜观察碘化丙啶（PI）染色的细胞凋亡形态；流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化；免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白（VEGF-C蛋白）表达水平变化。 结果 不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖（P < 0.05）；流式细胞仪分析显示，17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升，G1/G0期细胞比例下降；0.63、1.25、2.5、5.0 μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为（3.23±1.43）%、（9.71±2.20）%、（14.15±2.34）%、（23.65±2.58）%；随着药物浓度的加大，VEGF-C蛋白表达逐渐减少。 结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，并能抑制VEGF-C蛋白的表达。

[关键词] 热休克蛋白90；17-AAG；肝细胞癌；MTT法

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）10（c）-0012-04

Effects of 17-AAG on proliferation and apoptosis of human hepatoma carcinoma cell lines HepG2

CHEN Meini1 GUO Wei2▲ ZHAO Jumei1 WEI Xiaoli1 WANG Aihong1 PANG Qiuxia1

1.Center of Medical Experiment， Medical College of Yan′an University， Shaanxi Province， Yan′an 716000， China； 2.Department of Urology Surgery， the Affiliated Hospital of Medical College of Yan′an University， Shaanxi Province， Yan′an 716000， China

[Abstract] Objective To study the effect of 17-allylamino-17-demethoxygelda-namycin （17-AAG） on cell proliferation and apoptosis in human hepatoma carcinoma cell lines HepG2 and analyze the possible mechanism. Methods The human hepatoma carcinoma cell lines HepG2 cells were treated with different concentrations of 17-AAG in vitro， the cell proliferation was analyzed by the MTT； the cell apoptosis changes was observed using PI dyeing under the fluorescence microscope； the effect of 17-AAG on apoptosis and cell cycle were assayed through flow cytometry； the expression of VEGF-C protein was detected by immunohistochemistry. Results 17-AAG significantly suppressed the proliferation of HepG2 cells in a time and dose-dependent manner （P < 0.05）. Flow cytometry analysis showed that 17-AAG could increase the cell population in G2/M phase and reduce the cell population in G1/G0 phase at 48 h. HepG2 cells were treated with 17-AAG of 0.63， 1.25， 2.5 and 5.0 μmol/L concentrations for 48 h， the apoptosis rate were （3.23±1.43）%， （9.71±2.20）%， （14.15±2.34）% and （23.65±2.58）%. The expression of VEGF-C protein was reduced with the increase of drug concentration. Conclusion 17-AAG can inhibit proliferation and induce apoptosis of HepG2 cells， and can decrease the expression of VEGF-C protein.

[Key words] HSP90； 17-AAG； Hepatocellular carcinoma； MTT

原发性肝细胞癌是全球第5位常见恶性肿瘤，其病死率占恶性肿瘤病死率的第3位。据2008年的报道，中国肝癌5年患病数为29.6万例，约占全球肝癌5年患病数的48.3%。在未来10年肝癌的发病数和病死数均将呈现上升趋势。采用手术切除等治愈方法仅适合10%～20%的肝癌患者，在5年内复发率仍超过70%[1]。所以寻找以肿瘤细胞特性为作用靶点的分子靶向治疗有着特别重要的意义。HSP90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧格尔德霉素（17-AAG）对多种肿瘤细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，但目前尚未见17-AAG对肝癌细胞生长及凋亡影响的报道，本文探讨17-AAG对HepG2细胞增殖、生长周期、诱导凋亡及对重组人血管内皮生长因子相关蛋白（VEGF-C）的表达进行初步探讨，为17-AAG治疗肝癌的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

人肝癌细胞株HepG2由延安大学医学院实验中心提供。RPMI-1640培养基（赛默飞世尔公司），17-AAG、四甲基偶氮唑蓝（MTT）及碘化丙啶（PI）（美国Sigma公司）AnnexinV FITC细胞凋亡检测试剂盒（美国BD pharmingen公司），RNase A酶（德国Merck公司），胎牛血清（美国Hyclone公司），兔抗人VEGF-C蛋白、兔二抗及DAB显色剂（武汉博士德公司）。……