香椿组织培养技术研究

2014-11-16王晓蕾方国臻

食品研究与开发 2014年13期

关键词：恒温箱培苗小苗

王晓蕾，方国臻

（天津科技大学，天津300457）

香椿（Toona sinensisRoem）是楝科香椿属乔木，树干通直，生长迅速，具有很高的营养价值、药用价值和食疗价值。

随着生活水平的提高，人们逐渐加深对健康饮食的认识，香椿的营养价值也越来越被人们认可，在香椿组织培养中容易出现褐化、叶片污染、茎段污染等现象[1-4]。

通过研究香椿组织培养技术，可以扩大香椿幼苗的生产量，缩短香椿幼苗的生长周期，进而缩短香椿树生长嫩叶的时间，从而降低香椿嫩叶的市场价，让普通大众更容易接受。达到利用食品生物技术实现香椿的商业价值的目的。

1 材料、试剂和仪器

1.1 材料

香椿、香椿种子：由实验室提供。

1.2 试剂

乙醇（分析纯）：天津市化学试剂一厂；升汞（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；B5培养基（生化试剂）：上海宇涵生物技术有限公司；蔗糖；琼脂；碳酸钠。

1.3 仪器、型号及生产厂家

SW-CJ-1FD单人单面净化工作台：苏州净化设备有限公司；SHP-250生化培养箱：上海山连实验设备有限公司；DHG电热恒温鼓风干燥箱：巩义市予华仪器有限责任公司；电子天平、电磁炉、电子计价秤、电子天平。

2 方法

2.1 香椿组织培养

2.1.1 香椿组织培养方案1

2.1.1.1 制作B5培养基

取B5培养基3.25 g、30 g/L蔗糖、0.8%琼脂，将混合物放于烧杯中，加入1L蒸馏水，在电磁炉上煮沸。将混合均匀的培养基倒入三角瓶中。然后将培养基，培养瓶，纱布置于立式压力蒸汽消毒器中灭菌30 min。灭菌结束后，将培养基倒入培养瓶中，即制成B5培养基。

2.1.1.2 培养香椿幼苗

将香椿种子去壳，除去杂物，用水清洗2次。然后将种子置于烧杯中浸泡，放到25℃恒温箱中（12 h）。除去漂浮的种子，清洗下层的种子，将其置于盘子中，用湿纱布盖上，放到25℃恒温箱中（12 h）。取少许种子，放于培养皿中，用75%酒精溶液消毒20 s，再用0.1%升汞溶液消毒5 min，无菌水冲洗4次～6次。在超净台中将种子接种于B5培养基中，香椿种子的小头朝下接种，培养无菌香椿幼苗。

2.1.1.3 香椿组织培养

在超净台上，挑取生长良好的无菌苗，切取其叶片，再次接种到B5培养基（含6-苄基嘌呤和萘乙酸）中。

2.1.1.4 观察组培苗的生长状况

每天观察组培苗的生长状况。

2.1.2 香椿组织培养方案2

2.1.2.1 制作B5培养基

2.1.2.2 培养香椿幼苗

将香椿种子去壳，除去杂物，用水清洗2次。然后将种子置于烧杯中浸泡，放到25℃恒温箱中（12 h）。除去漂浮的种子，清洗下层的种子，将其置于盘子中，用湿纱布盖上，放到25℃恒温箱中，香椿种子及纱布每天早晚清洗一次，注意观察种子的发芽状况，发现种子发芽即可将其种在沙土中，每天浇水，保持沙土表面湿润，培养香椿幼苗。

2.1.2.3 香椿组织培养

在超净台上，挑取生长良好的香椿幼苗，切取其叶片用75%酒精溶液消毒20 s，再用0.1%升汞溶液消毒5 min，无菌水冲洗4次～6次。在超净台中将种子接种于B5培养基（含6-苄基嘌呤和萘乙酸）中。

2.1.2.4 观察组培苗的生长状况

每天观察组培苗的生长状况。