景临林，范小飞，2，马慧萍，樊鹏程，贾正平＊

（1.兰州军区 兰州总医院药剂科，甘肃 兰州730050； 2.兰州大学 药学院，甘肃 兰州730000）

鹰嘴豆芽素A（biochanin A，4′－甲氧基－5，7－二羟基异黄酮）属于天然异黄酮家族，在豆类植物和红三叶草中含量丰富.它能竞争性的与雌激素受体结合，发挥与雌激素一样的作用，是一种重要的植物雌激素［1］.经常食用鹰嘴豆芽素A，对人和动物的健康是有益的，可用于骨质疏松症和更年期综合症等疾病的预防和治疗［2］.近年来的许多研究表明，鹰嘴豆芽素A还具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗骨质疏松、降血糖、抑制黑色素生成和神经保护等多种生物活性［3－9］，但是其溶解性差，在体内代谢和清除速率快，生物利用度很低.

1，2，3－三氮唑是多种抗真菌、抗细菌、抗结核、抗癌药物中关键的功能团分子［10］，主要通过Cu催化的“Click chemistry”得到.将糖基引入到三氮唑类分子中可增强其亲水性和导向性，改变药代动力学性能，增强其生物活性［11］，已经成为设计合成结构新颖、活性优异的新化合物的重要手段之一.

为了提高鹰嘴豆芽素A的药理活性、增加其代谢稳定性和生物利用度，本文作者以D－木糖，炔丙基溴和鹰嘴豆芽素A为原料，根据药物拼合原理，将糖基化三氮唑分子与鹰嘴豆芽素A结合，合成得到三氮唑木糖苷化鹰嘴豆芽素A，产物结构经1H NMR、红外光谱、质谱和元素分析确认.目标化合物合成路线见图1和图2.

图1 β－D－三乙酰木糖叠氮化物的合成路线Fig.1 Synthesis ofβ－D－O－acetyl－xylopyranosyl azide

图2 木糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A的合成路线Fig.2 Synthesis of xylosyltriazole biochanin A derivative

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

X－4B型显微熔点仪（温度计未校正），上海精科实业有限公司；NEXUS 670型傅立叶变换红外光谱仪，KBr压片，美国尼高力分子光谱仪器公司；Vario EL cube型元素分析仪，德国艾力蒙塔公司；Brucker AVANCE III 400型核磁共振波谱仪，瑞士Brucker Biospin公司；API 3200型LC／MS／MS质谱仪，美国应用生物系统公司.

鹰嘴豆芽素A（纯度98%），陕西慈缘生物技术有限公司；732阳离子树酯，阿拉丁试剂公司；柱层析硅胶（200～300目）和 GF254高效薄层硅胶板（10×20cm），青岛海洋化工厂分厂；CDCl3和 DMSO－d6，内标TMS，sigma公司，其他试剂均为市售分析纯.无水的溶剂经脱水干燥处理.

1.2 三乙酰木糖叠氮化物参考文献［12］方法制备

1.3 4′－甲氧基－5－羟基－7－炔丙氧基异黄酮（1）

将2.84g（10mmol）鹰嘴豆芽素 A、3.36g（20mmol）K2CO3和100mL无水丙酮加入单口瓶中，剧烈搅拌下缓慢加入2mL溴丙炔，回流反应3h.TLC监测反应完全后，体系降至室温，加入100mL水，45℃减压除去丙酮，过滤，滤饼依次用200mL蒸馏水、100mL 1mol／L盐酸溶液和200mL蒸馏水洗涤，真空干燥后得到3.09g浅黄色固体，产率96%.m.p.：152.1～154.7℃；1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：12.88（1H，s，C5－OH），7.89（1H，s，C2－H），7.46（2H，d，J＝8.4Hz，C2′－H，C6′－H），6.99（2H，d，J＝8.8 Hz，C3′－H，C5′－H），6.50（1H，d，J＝2.0Hz，C6－H），6.46（1H，d，J＝2.0Hz，C8－H），4.76（2H，d，J＝2.0Hz，C11－H），3.85（3H，s，C4′－OCH3），2.59（1H，s，C13－H）；ESI－MS（m／z）：323［M＋H］＋.IR （KBr）：3 443，2 123，1 755，1 665，1 614，1 577，1 516，1 358，1 303，1 245，1 216，1 187，1 051，817.

1.4 4′－甲氧基－7－（1－（（2′，3′，4′－三乙酰基－β－D－木糖基）－1，2，3－三氮唑－4－基）甲氧基）－5－羟基异黄酮（2）

将3.23g（10mmol）化合物1分散于100mL叔丁醇和水（体积比1∶1）的混合溶剂中，搅拌下依次加入4.48g（12mmol）三乙酰木糖叠氮化物、0.2mmol抗坏血酸钠和0.1mmol五水硫酸铜，55℃剧烈搅拌反应6h，将反应体系降至室温，加入20mL 2mol／L HCl，用100mL CH2Cl2萃取一次，有机相用水洗涤（100 mL×2），无水硫酸钠干燥12h，过滤，减压除去溶剂后快速柱层析分离，浓缩干燥后得5.42g白色固体，产率83%.m.p.：217.6～218.8℃；1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：12.86（1H，s，C5－OH），7.89（1H，s，C2－H），7.85（1H，s，C13－H），7.46（2H，d，J＝8.8Hz，C2′－H，C6′－H），6.98（2H，d，J＝8.8Hz，C3′－H，C5′－H），6.43（1H，d，J＝2.0Hz，C6－H），6.43（1H，d，J＝2.0Hz，C8－H），5.81（1H，d，J＝8.4Hz，C1″－H），5.46～5.35（2H，m，C2″－H，C4″－H ），5.27（2H，s，C11－OCH2），5.15（1H，m，C3″－H），4.31（1H，dd，J＝5.6，11.6Hz，C5″－H），3.85（3H，s，C4′－OCH3），3.60（1H，t，C5″－H），2.08（3H，s，COCH3），2.05（3H，s，COCH3），1.89（3H，s，COCH3）；ESI－MS （m／z）：624 ［M＋H］＋.IR（KBr）：3 440，1 752，1 658，1 612，1 579，1 516，1 371，1 249，1 224，1 181，1 047，835.A－nal.calcd.for C30H29N3O12：C 57.78，H 4.69，N 6.74；found C 57.81，H 4.72，N 6.63.

1.5 4′－甲氧基－7－（1－（（2′，3′，4′－三羟基－β－D－木糖基）－1，2，3－三氮唑－4－基）甲氧基）－5－羟基异黄酮（3）

将0.62g（1mmol）化合物2置于100mL三口烧瓶中，加入50mL甲醇，冷却至0℃，氮气保护下缓慢滴加1.2mL 1.0mol·L－1甲醇钠的甲醇溶液，升温至室温继续反应3～4h，利用TLC监测反应完全后，用732阳离子树酯调节体系至中性，有大量白色不溶物析出，冷却后过滤，用冰甲醇洗涤滤饼数次，真空干燥后得0.46g白色固体，为目标化合物3.产率92%.m.p.：172.5～174.4℃；1H NMR（DMSO－d6，400MHz）δ：12.94（1H，s，C5－OH），8.51（1H，s，C2－H），8.48（1H，s，C13－H），7.53（2H，d，J＝8.4Hz，C2′－H，C6′－H），7.02（2H，d，J＝8.8Hz，C3′－H，C5′－H），6.85（1H，d，J＝1.6Hz，C6－H），6.54（1H，d，J＝1.6Hz，C8－H），5.52（1H，d，J＝9.2Hz，C1″－H），5.46（1H，d，J＝6.4Hz，C4″－OH），5.30（2H，s，C11－OCH2），5.20（1H，d，J＝4.8Hz，C2″－OH），3.84～3.81（3H，m，C3″－OH，C4″－H，C5″－H），3.80（3H，s，C4′－OCH3），3.76（1H，d，J＝9.2Hz，C2″－H），3.49（2H，m，C3″－H，C5″－H）；ESI－MS（m／z）：498［M＋H］＋.IR（KBr，cm－1）：3 397，1 653，1 610，1 578，1 515，1 450，1 252，1 179，1 152，1 050，835.Anal.calcd.for C24H23N3O9：C 57.95，H 4.66，N 8.45；found C 57.80，H 4.73，N 8.50.

2 结果与讨论

2.1 合成方法

1，2，3－三氮唑及其衍生物在自然界至今尚未发现，只能通过有机合成的方法获得.Cu（I）催化端基炔和叠氮化合物进行的“Click chemistry”反应是快速、高效、高立体选择性获得大量1，2，3－三氮唑衍生物的可靠方法［13］.文献有关 “Click chemistry”反应条件的报道很多，通过对反应条件进行优化，我们以叔丁醇∶水（体积比1∶1）体系为溶剂、五水硫酸铜／抗坏血酸钠为催化剂、55℃条件下反应时间6h，最终以83%的产率得到了目标化合物2.在去除化合物2中的乙酰基时，为了避免糖苷键在酸性条件下水解，本文作者采取了碱性水解法，反应结束后用强酸性阳离子交换树脂调节pH，经过简单过滤、洗涤即得目标化合物3，操作简便，避免了柱色谱分离，产率较高.

2.2 结构表征

在化合物2和3的1H NMR谱中，鹰嘴豆芽素A分子中5－位羟基质子信号分别出现在12.86和12.94，7.85和8.51处的尖锐单峰为三氮唑结构中质子信号，－CH2－的质子信号分别出现在5.27和5.30处，证明三氮唑基团成功地引入到鹰嘴豆芽素A分子结构中.当化合物2水解完全后，2.00附近三个乙酰基的质子信号消失，化合物3在3.84～5.35出现羟基质子信号.

在化合物2和3的红外谱图中，3 440和3 397cm－1出现典型羟基吸收峰；1 650cm－1附近为异黄酮结构中羰基的特征吸收峰；1 750cm－1为乙酰基中羰基的特征吸收峰.化合物3中1 750cm－1附近的吸收峰消失，证明分子结构中的乙酰基被完全水解.

3 结论

为了获得代谢稳定性更好、活性更强、生物利用度更高的新型鹰嘴豆芽素A衍生物，本文作者以D－木糖，炔丙基溴和鹰嘴豆芽素A为原料，将鹰嘴豆芽素A与木糖苷通过1，2，3－三氮唑结构相连，合成了一种新型木糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A衍生物.该合成路线短、操作简单，反应条件温和、产率较高，产物结构经波谱分析与目标化合物一致，为鹰嘴豆芽素A的开发利用和生物活性研究奠定了基础.

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