张炜煜，孙敬蒙，叶豆丹

(长春中医药大学，长春 130117)

治郁颗粒活性成分大鼠体内分布的研究

张炜煜，孙敬蒙，叶豆丹*

(长春中医药大学，长春 130117)

目的 观察采用经典强迫游泳试验确定治郁颗粒的最佳给药剂量及高效液相色谱法，以芍药苷的含量为内标物，研究治郁颗粒活性成分栀子苷在大鼠体内各组织脏器中的分布。方法 以4种剂量小鼠灌胃给予治郁颗粒混悬液，以4 min内累计不动时间为考察指标，确定药物的最佳给药剂量。治郁颗粒混悬液0.02 g/mL灌胃给予大鼠，给药剂量为0.10 mL/kg体质量，连续给药4 d。结果 确定药物的浓度为0.02 g/mL为最佳给药浓度，即小鼠剂量为0.2 g/kg体质量，换算成人的服用量为每日4.4 g/60 kg。大鼠末次给药45 min后，各组织及血液中均检出栀子苷，各脏器中栀子苷含量大小顺序为肝＞肾＞肺＞脾＞血＞心＞脑，其中脑组织栀子苷含量为(1.223±0.277)μg/g。结论 该方法稳定、可行，方中活性成分栀子苷能通过血脑屏障，为治郁颗粒的抗抑郁机制提供了理论依据。

治郁颗粒;活性成分;高效液相色谱法;大鼠

治郁颗粒是在长春中医药大学附属医院赵建军教授20多年来的经验方剂基础上研制而成，由栀子、郁金、黄连等药材组成，具有疏肝解郁，清肝泻火之功效。其活性成分栀子苷可以降低脑缺血型大鼠脑内TNF-α、IL-1β和ICAM-1等炎性因子的表达，减轻脑缺血对脑神经元的损害，从而对脑神经元起到保护作用［1-3］。本文采用经典强迫游泳试验确定治郁颗粒的最佳给药剂量，对灌胃给药后栀子苷在大鼠各组织脏器及血液中的含量进行测定，研究其体内的分布规律，为深入研究治郁颗粒抗抑郁的机制提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 材料 治郁颗粒混悬液(自治)，栀子苷对照品和芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110749-200714、110736-200934)，乙腈和甲醇(Sigma公司)，哇哈哈纯净水(娃哈哈集团有限公司)，舒肝解郁胶囊(成都康弘制药有限公司，批号:20110802)。昆明种小鼠体质量(20±2)g、SD大鼠体质量(200±2)g，雌雄各半，由长春高新医用实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 采用经典强迫游泳试验筛选治郁颗粒最佳给药剂量 取昆明种小鼠 72只，雄性，体质量(20±2)g，随机分成6组，分别为空白组，阳性对照组，给药1～4组，每组12只;阳性对照组灌胃给予舒肝解郁胶囊混悬液，给药1～4组分别灌胃给予浓度为0.20，0.10，0.05，0.02 g/mL 治郁颗粒混悬液，给药剂量均为0.10 mL/kg体质量，空白对照组小鼠灌胃给予等量生理盐水。1次/d，连续7 d。末次给药后1 h进行试验。将小鼠单个放入高20 cm、直径18 cm、水深10 cm、水温(25±2)℃水缸中，观察6 min，适应2 min，记录后4 min内累计不动时间(s)，采用t检验进行组间比较。

1.2.2 测定治郁颗粒主要活性成分体内分布规律取SD大鼠24只，雄性，体质量(20±2)g，随机分为2组，每组12只，分别为空白组和治郁颗粒组，治郁颗粒组灌胃给最佳剂量的治郁颗粒混悬液，给药剂量为0.10 mL/kg体质量，空白组给以等量生理盐水，连续给药4 d。末次给药45 min后，将大鼠断头处死，取各脏器及血液，计算各脏器及血液中治郁颗粒活性成分栀子苷的含量。

2 结果

2.1 治郁颗粒最佳给药剂量 见表1。

2.2 治郁颗粒主要活性成分体内分布规律 见表2。

表1 治郁颗粒对小鼠游泳不动时间的影响(±s，n=12)

表1 治郁颗粒对小鼠游泳不动时间的影响(±s，n=12)

注:与空白对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组 别 剂量/(g/mL) 游泳不动时间/s空白对照组 — 124.88±40.47阳性对照组 0.01 82.86±24.92#给药组1 0.20 70.38±15.86##给药组2 0.10 73.37±19.21##给药组3 0.05 80.86±23.54#给药组4 0.02 82.30±13.74##

表2 大鼠各脏器及血液栀子苷含量测定结果(±s，n=12)μg/g

表2 大鼠各脏器及血液栀子苷含量测定结果(±s，n=12)μg/g

脏器 栀子苷含量 脏器 栀子苷含量心3.676±0.526 肾5.519±1.223肝7.286±1.856 脑 1.223±0.277脾4.387±1.126 血 4.256±1.641肺4.835±1.793

3 小结

栀子苷的体内分析方法国内仅有少数报道。有学者在给大鼠灌胃给药后将动物脏器匀浆，取匀浆液经吸附树脂纯化后测定其中栀子苷含量。该方法操作相对繁琐，干扰因素较多，对试验结果影响较大。也有学者［4-7］将脏器匀浆后离心，取上清液，挥干，以HPLC检查时的流动相将残渣溶解，测定含量，虽操作相对简单，并能保证栀子苷的浓度，但是如果使用的是混合流动相，在溶解残渣的过程中流动相的比例可能发生变化，有可能对试验结果造成影响。本试验中所建立的栀子苷的体内分析方法方便快捷，专属性强，重复性好，为同类试验提供了一定参考。

:

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［2］汪玉芳.心达欣胶囊对抑郁模型小鼠行为学的影响及抗抑郁作用机理的研究［D］.广州:暨南大学，2009.

［3］晏艳，冯芳，王丹.栀子厚朴汤抗抑郁活性成分的研究［J］.药学进展，2010，34(6):275-280.

［4］高红梅，张啸环.高效液相色谱法测定解郁安神颗粒中栀子苷的含量［J］.长春中医药大学学报，2011，27(1):13-14.

［5］王巧明，杨建瑜，焦海胜，等.栀子中栀子苷家兔药动学研究［J］.中国新药杂志，2009，18(11):1047-1049.

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Active ingredient ofZhiyu Particlesdistribution in rats

ZHANG Weiyu，SUN Jingmeng，YE Doudan*
(Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China)

Abstract:ObjectiveUsing the forced swimming test to determine the optimum dosage ofZhiyu Particles，using high performance liquid chromatography，with paeoniflorin as internal standard，to study the jasminoidin distribution in rats，that was active ingredient ofZhiyu particles.MethodsWith 4 different dosages mice were orally administeredZhiyu Particles，suspension，4 min motionless time as the indexes，determine the best concentration.With 0.02 g·mLZhiyu Particles，suspen-sion，administered at a dose of 0.10 mL·kg bw，was best，the mice at a dose of 0.2 g·kg bw，dose conversion of 4.4 g/60(kg·d)for continuous administration for 4 Days.ResultsThe drug concentration of 0.02 g·mL adult.45 min after the last administration，the organization of jasminoidin was detected，the order is kidney ＞kidney＞lungs＞spleen＞blood＞heart＞brain，the content of jasminoidin in brain tissue was(1.223±0.277)μg/g，to prove the active ingredients in the prescription can pass the blood-brain barrier.Conclusion the result provides a theoretical basis for antidepressant mechanism ofZhiyu Particles.

Key words:Zhiyu Particles;active component;HPLC;rat

R285.5

A

2095－6258(2014)04－0596－02

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.012

吉林省中医药管理局中医药科技项目(2012-075)。

张炜煜(1963－)，女，教授，博士研究生导师。研究方向:药物新剂型与新技术研究。

叶豆丹，女，硕士，副教授，电话:0431-86172289，电子信箱:807783067@qq.com。

(

2014－03－24)