李恒斌 朱文博 王 冰 赵良辰

(吉林市中心医院心内科，吉林 吉林 132011)

中药沙棘有止咳祛痰、活血散瘀等作用，槲皮素(Que)是其主要黄酮类成分之一〔1〕。Que在心血管疾病的治疗和预防方面有广泛的应用前景，但是其对心肌纤维化的防治作用未见报道。本实验拟观察Que对血管紧张素(Ang)Ⅱ所致心肌细胞纤维化的抑制作用及信号传导机制。

1 实验材料与方法

1.1动物及药品 新出生的Wistar大鼠(SPF)，雌雄不限，购于吉林大学实验动物中心；Que、AngⅡ、转化生长因子(TGF)-β1购于美国Sigma公司；DMEM/F12培养基购于上海基免实业有限公司；胎牛血清、胰蛋白酶购于杭州四季青生物工程材料有限公司；TGF-β1 ELISA试剂盒购于上海恒远生物科技有限公司；聚合酶链反应(PCR)引物购于深圳华安平康生物科技有限公司；TRIZOL reagent，M-MLV逆转录酶购于Invitrogen公司；羟脯氨酸试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒购于南京建成生物公司。

1.2仪器 WD-9417A酶标仪，北京市六一仪器厂；725N紫外可见分光光度计，上海欣茂仪器有限公司；细胞超净工作台，上海基星生物科技有限公司；CO2培养箱， Helaeus公司。

1.3细胞分离、培养及分组 取3日龄新生Wistar乳鼠，处死后无菌条件下剪取出心室，放入D-Hanks液中清洗、剪碎，用枪吹打数次，离心5 min，弃去上清，置于37℃水浴中，加入胰蛋白酶消化10 min，10%血清终止。1 500 r/min离心5 min，取上清，细胞加入DMEM/ F12培养基中，37℃、5% CO2孵箱中培养90 min，使用差速贴壁方法将心肌细胞除去。取3～4代心肌成纤维细胞(CFB)进行实验。取96孔板接种对数生长期细胞，基础培养基培养24 h。弃上清，加入不同浓度的Que干预24 h，实验分组：①对照组：完全培养基(15%胎牛血清)；……