刘 金 尤 涛 黄京子 宋 威

(吉化集团公司总医院,吉林 吉林 132022)

研究显示，雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂雷帕霉素除了作为器官移植后用于临床的免疫抑制剂作用外，也有明显的肿瘤细胞增殖抑制作用〔1，2〕。雷帕霉素对乳腺癌细胞，卵巢癌细胞，白血病和肺癌细胞表现出了明显的抑制作用〔3，4〕。但是确切机制还不是很清楚。自噬是细胞内降解损伤的蛋白质的降解过程，与肿瘤存在明显的相关性，但是自噬对化疗药物引起的凋亡的影响在不同的肿瘤细胞和不同的化疗药物中存在明显的不同〔5〕。本文研究自噬在mTOR抑制剂雷帕霉素引起的肿瘤细胞生长抑制中的作用。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器 雷帕霉素(Rapamycin),自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)，四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自Sigma公司(美国)，胎牛血清和DMEM培养基购自Gibco公司(美国)。

1.2细胞株与细胞培养 人肺癌A549细胞购自美国ATCC公司，细胞于含10%胎牛血清DMEM培养基中，当A549细胞生长至对数生长期时进行细胞传代和实验。

1.3MTT法检测细胞活性 A549细胞以1×104/ml密度接种于96孔细胞培养板中，每孔加100 μl，待细胞隔夜培养完全贴壁后给予不同的药物，继续培养20 h后，加入MTT溶液后继续培养4 h，结束后用加样器弃除上清，每孔加入150 μl二甲基亚砜(DMSO)，孔板振荡器上混匀10 min，用酶标仪于490 nm波长处测定吸光度(A)值，计算细胞存活率。

1.4Western印迹检测细胞蛋白表达 将各组药物处理过的A549细胞，加入细胞裂解液RIPA，用细胞刮将贴壁细胞刮下，收集到1.5 ml离心管中，裂解20 min后，离心收集上清，测蛋白浓度，加入上样缓冲液煮沸变性后进行丙烯酰胺凝胶电泳。……