吴 贇 陈 凌 汪义永 魏 斌

(福建医科大学附属第一医院口腔科，福建 福州 350004)

大量的流行病学调查和严格的临床对照统计分析，显示牙周感染与动脉粥样硬化(AS)密切相关〔1〕。牙龈卟啉单胞菌(Pg)是一种革兰阴性厌氧菌,是目前公认的牙周炎可疑致病菌，研究证实能够促进AS的发生和发展〔2〕。细胞因子表达调节异常在动脉粥样硬化发展过程中，发挥着关键作用。单核细胞趋化蛋白(MCP)-1可在多种细胞中表达〔3〕。白细胞介素(IL)-10是重要的炎症调控因子，具有抗炎和免疫调节作用,小鼠AS模型已证实IL-10能显著抑制泡沫细胞对脂肪颗粒的摄取,从而减少或延缓泡沫细胞的形成〔4〕。本实验通过观察Pg的脂多糖(LPS)对人主动脉内皮细胞(HAECs)在mRNA转录和蛋白质翻译水平表达MCP-1、IL-10的影响,探讨Pg促进AS发生发展的可能机制。

1 材料与方法

1.1主要试剂、仪器 新生牛血清(GIBCO，美国),Pg LPS(晶美生物工程公司), MCP-1酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(北京博凌科为生物科技),逆转录试剂盒(Promega, 美国),凝胶成像分析系统 (上海培清科技有限公司)，PCR扩增仪 (Heraeus 公司, 德国)。

1.2细胞培养 取原代HAECs(Scien Cell公司, 美国)接种于含生长因子、青链霉素和50 ml/L胎牛血清的内皮细胞培养基中，标准环境下复苏并培养至形成单层,待铺满培养板底70% 左右时，消化传代，取4～6代细胞用于实验。

将生长良好的HAEC接种于6孔培养板，接种细胞浓度为1×105/ml，孵育24 h贴壁后，当生长汇合度达到85%时弃原培养液，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗2次加入Pg LPS，分LPS 150 ng/L，LPS 100 ng/L，LPS 10 ng/L，空白对照组。

1.3ELLSA法测定MCP-1、IL-10的表达 12 h后取细胞上清，标本离心去除悬浮物后用于检测。……