陈施艳 冯飞阳 张志坚 周海涛 吴秀丽

(福建医科大学附属第一医院神经内科，福建 福州 350005)

帕金森病(PD)是一种中老年人常见的运动障碍疾病，以选择性中脑黑质多巴胺(DA)能神经元死亡及脑内出现Lewy小体为主要病理特点〔1〕。研究提示核因子(NF)-κB的激活与PD的病理机制有关〔2～6〕。Nanog是2003年Chambers等〔7〕和Mitsui等〔8〕分别用不同的研究战略同时克隆得到的基因，能不依赖于LIF/Stat3独自维持囊胚内细胞团(ICM)和胚胎干细胞(ESC)的多能性，从而得到高度重视。Torres等〔9〕在研究Nanog维持干细胞分化潜能作用时意外发现Nanog 蛋白能与NF-κB蛋白结合，并抑制NF-κB的转录。本研究设想通过抑制NF-κB的转录来延缓PD的病理过程，从而达到治疗该病的目的。在前期研究已成功构建携带Nanog基因的慢病毒载体，并证实其能抑制小鼠骨髓间质细胞中NF-κB的表达〔10〕，以及抑制脂多糖诱导的大鼠小胶质细胞中NF-κB的转录〔11〕，同时证实了6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的PD大鼠模型脑内存在炎症因子的升高〔11〕。为考察转Nanog基因在活体上的作用，本试验拟初步观察转Nanog基因对6-OHDA诱导的PD大鼠模型脑内NF-κB表达是否有影响。

1 材料与方法

1.1实验动物 清洁级雄性SD大鼠48只，体重250～300 g(上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证：SCXK沪2007-0005)。动物常温饲养,自由摄食、饮水，光照12 h，术前12 h 禁食。

1.2主要材料 ①慢病毒载体质粒PNL-IRES .EGFP，包装质粒HELPER，包膜质粒VSVG以及293T细胞均由美国杜兰大学陈一平教授惠赠。②Top10菌：由福建医科大学林建银教授惠赠。③主要试剂：逆转录酶、限制性内切酶BamH Ⅰ和Sal Ⅰ(Promega)，高保真Pfu ultra DNA聚合酶(Strategen)，Trizol以及脂质体lipofectamin 2000(Invitrogen)，polybrene(Sigma)，质粒抽提试剂盒(Qiagen)，DNA凝胶回收试剂盒(上海博亚生物公司)。……