胡小令 桂 婷 黄涛波 吕 诚 李耀斌 薛国勇 温 蔚 石嘉庆

(南昌大学医学院解剖学教研室，江西 南昌 330006)

β淀粉样蛋白(Aβ)异常沉积引起的慢性神经炎症反应是阿尔茨海默病(AD)形成和发展的关键因素。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是炎症中的一种反应性酶类，其产生的大量一氧化氮(NO)是炎症损伤的重要因子之一，与Aβ的神经毒性密切相关〔1，2〕。抗炎药物在治疗AD方面可能具有一定的作用。从卫矛科植物雷公藤中分离出的雷公藤内酯醇具有抗炎、免疫抑制作用。本实验探求雷公藤内酯醇治疗AD的作用机制。

1 材料和方法

1.1主要试剂及仪器 Aβ1～40(Sigma公司)；雷公藤内酯醇(纯度为99.8%，批号070929，福建省医学科学研究所，溶于4%丙二醇溶液中，经200目过滤器滤过除菌后备用)；兔抗诱导型一氧化氮合酶(iNOS)多克隆抗体(Santa cruz公司)；SP免疫组织化学试剂盒(Zymed公司)；DAB染色试剂盒(北京中杉公司)；江湾Ⅰ型C大鼠立体定位仪(上海川沙花木农机厂)；电脑快速恒温冷冻切片机(金华市益迪医疗设备厂)；Image-Pro Plus v5.1显微图像分析系统(Media Cybernetics公司)；H-600透射电镜(日立公司)。

1.2动物分组与处理 用无菌生理盐水将Aβ1～40稀释成10 μg/μl，37℃孵育1 w，使其变为凝聚态的Aβ1～40。4月龄体质量250～275 g的SD雄性大鼠由南昌大学医学院实验动物科学部提供。用Morris水迷宫初筛，去除先天痴呆和游泳姿势不良者，随机抽取7只合格大鼠，按照本课题组以往的模型制作法〔3〕给予左侧海马(以Bregma点为0点，AP-3.0 mm，ML 2.0 mm，DV-2.9 mm)一次性注射生理盐水1 μl，设为对照组。其余合格大鼠给予左侧海马(注射部位同上)一次性注射凝聚态Aβ1～401 μl复制AD模型，在术后1 w进行Morris水迷宫实验，以对照组大鼠逃避潜伏期均值的95%上限值为标准，将超出上限值者确定为痴呆大鼠。……