康郑军 李 伟 王 坦 朱艳琴 沈晓君

(郑州大学第五附属医院，河南 郑州 450052)

前列腺癌严重威胁男性健康。内分泌治疗通过去除或阻止雄激素对前列腺癌细胞产生作用，暂时抑制前列腺癌细胞的生长，延缓疾病的恶化进展，但晚期特别是转变为雄激素非依赖性的前列腺癌，则成为临床治疗的难点。丹参酮ⅡA是从丹参中提取出来的脂溶性有效成分之一，本实验通过观察丹参酮ⅡA对PC-3人前列腺癌细胞周期及细胞周期调控相关蛋白CyclinD1和CDK4表达的影响，探讨其拮抗PC-3增殖的机制。

1 材料与方法

1.1细胞株 PC-3人前列腺癌细胞购自中国科学院细胞库。

1.2药品及试剂 丹参酮ⅡA对照品购自中国药品生物制品鉴定所,20 mg/瓶,批号：200619。鼠抗人CyclinD1单克隆抗体，兔抗人CDK4单克隆抗体，羊抗鼠FITC-IgG(1∶400)，羊抗兔FITC-IgG(1∶400)试剂均购自Santa cruz。胎牛血清购自杭州四季青公司；胰蛋白酶、DMEM为Gibco BRL产品。

1.3主要仪器 BD公司FACS Calibur流式细胞仪；苏净集团安泰公司209b型超净工作台；德国GMBH公司Hera CO2细胞培养箱；日本Olympsu Optical公司BH-NIC-B型倒置显微镜。

1.4细胞培养与实验分组 在37℃、5%CO2条件下，用加入终浓度为100 mg/L的链霉素与青霉素、含有10%小牛血清的PRMI-1640培养基培养PC-3细胞，含0.01%EDTA的0.25%胰酶进行消化传代，处于对数生长期的第3～5代细胞用于实验。按1×108/L密度稀释后接种于96孔培养板每组设6个复孔，培养24 h。将细胞分为对照组和丹参酮ⅡA处理组。丹参酮ⅡA处理组分别加入终浓度0.25、0.5、1 mg/L的丹参酮ⅡA，培养48 h后，终止培养。

1.5MTT法细胞增殖能力检测 收集细胞，各组加入 MTT(5 mg/ml)液20 μl/孔，继续培养4 h，去上清，加入150 μl/孔二甲基亚砜(DMSO)，振荡10 min，上酶标仪490 nm处测吸光度值。……