刘学识博杰 张 辉 辛 丁 许承弼 王 托 李文静 鞠 洋 江 昌

(吉林大学第二医院，吉林 长春 130041)

喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一。早期症状和体征常不明显，确诊时大部分已属中、晚期，且由于其生长部位特殊，手术很难彻底切除病灶，必须进行综合治疗。因此，寻求喉癌治疗的有效药物具有十分重要的意义。斑蝥酸钠系斑蝥主要抗肿瘤活性成分——斑蝥素的半合成衍生物〔1〕，用于中晚期肝癌、肾癌、胃癌、宫颈癌等的治疗获得较为满意的结果，但用于头颈肿瘤的治疗较少。本研究应用人喉癌细胞(Hep-2)为靶点，观察不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6制剂对Hep-2增殖周期进程及凋亡率的改变。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1细胞及试剂 Hep-2细胞株由吉林省肿瘤研究所惠赠，四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂、RPMI 1640培养基购于美国Sigma公司，斑蝥酸钠维生素B6注射液10 ml/支，内含斑蝥酸钠0.1 mg、维生素B625 mg，贵州柏强制药有限公司生产，胎牛血清购于长春生物制品研究所。

1.2方法

1.2.1MTT比色法 取对数生长期的Hep-2细胞经0.25%胰蛋白酶消化，调细胞数为2×105/ml，接种于96孔塑料培养板内，100 μl/孔，当细胞生长达到80%汇合时，分为0 μg/ml组(对照组)、1 μg/ml组、2.0 μg/ml组、4.0 μg/ml组和8.0 μg/ml组，每个浓度10复孔，置37℃ 5%二氧化碳培养箱内静止培养24 h，于结束前6 h加入MTT试剂20 μl/孔，终浓度为500 mg/L。继续培养6 h后，弃去上清，每孔内加入二甲基亚砜(DMSO)150 μl，振荡5 min，促进MTT还原产物完全溶解，应用酶标仪于570 mm处测定各孔吸光度A值，按下列公式计算Hep-2细胞增殖抑制率，每组实验重复3次，取平均值，Hep-2细胞抑制率=(1-加药孔细胞A值÷对照孔细胞A值)×100%。对照……