1.广西中医药大学制药厂，广西 南宁 530001；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001；3.广西壮族自治区妇幼保健院 广西 南宁 530001

1HPLC法测定白子菜中黄酮类物质的含量

彭勇1徐业燕3杜成智2*

1.广西中医药大学制药厂，广西 南宁 530001；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001；3.广西壮族自治区妇幼保健院 广西 南宁 530001

目的建立白子菜中黄酮类物质(芦丁)的含量测定方法。方法采用Waters Symmetry C18色谱柱，流动相为甲醇-1%冰醋酸(35∶65)，检测波长为358nm，柱温25℃。结果芦丁在0.0232～0.116μg (r=0.9998)范围内线性关系良好，平均加样回收率为99.4%，RSD为0.9%。结论该法简便可行，结果准确，重复性好，可用于该药材的含量测定。

白子菜；HPLC；芦丁

白子菜是菊科植物白子菜Gynuradivaricata(L.)DC.的全草，别名白背三七、大肥牛、枪刀药、清心菜、土生地、白仔菜药等[1]，多年生草本植物，主产于广西，在南方各省均有分布。全草消热解毒，活血化淤，去风消肿，根入药，有泻火、凉血、生津之功效，是民间治疗乳腺炎、关节炎、气管炎等各种炎症常见中草药[2]。现代药理学研究表明[3-4]，以上功效与黄酮化合物有关。为有效控制药材质量，本研究参考相关文献[5-6]建立了白子菜中芦丁的含量测定方法。

1 仪器与试药

美国Agilent 1260 Series高效液相色谱仪:四元泵，在线脱气机，自动进样器 (G1329B)，柱温箱；KQ3200B型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；LG16-WA台式高速离心机(北京京立离心机有限公司)；超纯水系统(MILLIPORE)；电子分析天平(CP224S，Sartorius 德国)。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100080-200707)。白子菜(采自南宁市郊区)由广西中医药大学药用植物教研室鉴定为菊科植物Gynura divaricata(L.)DC.的全草。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Waters Symmetry C18色谱柱(250mm ×4.6mm,5μm)，柱温25℃；流动相: 甲醇-1%冰醋酸(35∶65)，流速1.0ml/min；检测波长358nm，进样量10μl。

2.2 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含芦丁0.58mg的溶液，即得芦丁储备液。

2.3 供试品的制备 取60℃烘干的白子菜地上部分粉碎后，过筛备用。精密称取经过前处理的白子菜粗粉1g，精密加入甲醇25ml，精密称定后超声处理30min，放冷，补足减失重量。滤过后取续滤液离心10min，静置，用0.45μm滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.4 系统适应性试验 吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，按“2.1 项”下色谱条件记录色谱图，色谱图见图1-2，芦丁峰与邻近峰达到基线分离，分离度良好(R>1. 5)。

2.5 线性试验 精密吸取对照品储备液适量，加甲醇定容，配制系列对照品溶液，分别吸取10μl注入高效液相色谱仪，按“2.1项”下色谱条件测定峰面积。以对照品的进样量(μg)对峰面积进行线性回归，求得回归方程，为Y=16987X-28.1，r=0.9998，线性范围为0.0232～0.116μg。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，依次测定。测得RSD为0.09%(n= 6)，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液按“2.1项”下色谱条件分别于0、2、4、6、8、12h进样测定，测得结果RSD为0.79% (n = 6)。结果表明样品溶液在12h内稳定。

2.8 重复性试验 取白子菜药材，按“2.3项”下供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液6份并依法测定，计算得大芦丁平均含量为0.543mg/g，RSD为1.6% ( n = 6)，说明该法重复性较好。

2.9 加样回收率试验 取已知含量并经前处理的药材6份，取约1g，精密称定，分别精密加入一定量的芦丁对照品溶液，其余操作按2.3项下供试品溶液的制备方法，测定，计算，结果芦丁平均加样回收率为99.4%，RSD=1.6% (n=6 )，说明本方法准确度较好。结果见表1。

表1加样回收率试验结果(n=6)

原有量/mg加入量/mg测定量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%0 53740 58001 112399 1299 40 90 54280 58001 121499 760 54470 58001 122199 550 53810 58001 109798 550 53960 58001 1253101 00 54160 58001 112598 43

2.10 样品含量测定 取6批样品，按“2.3项”制备供试品溶液，在“2.1项”色谱条件测定，结果见表2。

表2 含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 在实验过程中，曾分别采用不同比例的乙醇、甲醇超声提取和回流考察提取率，结果显示100%甲醇超声提取即可较好去除干扰杂质又可提取完全效果最佳。

3.2 在流动相的选择中，分别考察了多种流动相的分离效果，经过实验分析，综合考虑了分离效果、基线平稳、操作方便性等情况，最终确定甲醇-1%冰醋酸(35∶65)为最佳流动相，该条件下测定物质出峰快，与杂质峰的分离度均达到1.5以上。

3.3 白子菜的化学成分研究发现其含有黄酮类物质。近现代药理学研究表明，白子菜的药用效果与黄酮化合物有关。国内生物医药企业通过技术开发、粗加工、精细提取人体生理活性有效成分，加工提取白子菜浓缩汁、固体饮料、冻干产品、萃取物(黄酮、多糖提取)等系列产品。本方法对白子菜药材中芦丁的含量测定方法进行初步探索。该法简便可行，结果准确，重复性好，可用于白子菜药材及含白子菜制剂中芦丁的含量测定。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草[M ]. 上海: 上海科学技术出版社, 1999: 7841

[2] 广东植物研究所. 海南植物志[M]. 北京:北京科技出版社, 1974: 416

[3] 姜曼花，胡剑卓，邱文高，等. 白背三七多糖和黄酮降血糖及耐缺氧作用[J]. 中国医院药学杂志, 2009，29(13)：1074-1076.

[4] 俞浩，毛斌斌，周国梁，等.白背三七总黄酮对糖尿病大鼠的降血糖作用[J]. 食品科学, 2013, 34(15): 295-298.

[5] 黄骐，林荣华，郑钊，等. 白子菜总黄酮含量的测定[J]. 福建师范大学学报(自然科学版), 2006，22(2)：118-120.

[6] 林荣华，代容春，陈由强. 白子菜总黄酮提取工艺研究[J]. 福建轻纺, 2009, (6): 28-30.

DeterminationofRutininGynuradivaricata(L.)DC.byHPLC

PENG Yong1, XU Ye-yan3, DU Cheng-zhi2*

1. Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning, Guangxi,530001；2.Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning, Guangxi,530001；3. Guangxi Maternal and Child Health Hospital, Nanning, Guangxi,530001

Objective: To establish a HPLC method for the determination of Rutin inGynuradivaricata(L.)DC..MethodWaters Symmetry C18 analytical column was used, mobile phase: methanol-1% glacial acetic acid (35∶65), UV detection wavelength was at 358nm; Column temperature was at 25℃.ResultUnder the chromatographic conditions used, the calibration curve of Rutin was linear in the range of 0.0232～0.116μg (r=0.9998). The average recoveries was 99.4%, RSD: 0.9%.ConclusionThe method is accurate, effective and feasible. It can be used for the determination of the contents of Rutin inGynuradivaricata(L.)DC..

Gynuradivaricata(L.)DC.; HPLC; Rutin

广西壮族自治区教育厅科研项目(201106LX263)；广西中医学院校级课题(P2010012)。

彭勇，男，广西南宁人，初级药师，从事药物分析研究。E-mail：837631027@qq.com

杜成智，男，讲师，E-mail：276561774@qq.com。

R284.1

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1007-8517(2014)07-0020-02

2014.02.17)