郭新荣 王瑞辉 吴 涛 史海龙 屈红艳 陕西中医学院（咸阳 712046）

NGF（nerve growth factor，NGF）是最早发现的典型的神经营养因子、研究最为广泛、最深入，其在神经细胞的发育、轴突的生长及递质的合成和细胞的凋亡等多个环节中发挥着重要的调控作用[1]。NGF能促进外周及中枢神经元的分化、生长和存活，在维持大脑正常的生理功能中发挥着极其重要的调节作用[2]。本研究旨在观察针刺不同时间干预治疗TBI的效果，选用NGF作为观察指标。

1 材料及方法

1.1 动物及分组 实验大鼠（批号：20121023）由西安交通大学实验动物中心提供，体重220～240g，适应性饲养3d，随机分为空白（A）、针刺1（B）、针刺2（C）、针刺3（D）和模型（E）组。

1.2 主要实验仪器设备及试剂 全自动脱水机（ZT-12J）、切片机（JJQ-P2016J，均湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公司）；包埋机（JB-L6，武汉俊杰电子有限公司）；冷冻高速离心机（德国eppendorf centrifuge 5417R）；PH酸度计德国（（Sartorius PB-10），赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；微型脱色摇床（TY-80S型，南京新校园生物技术研究所）；电泳槽（美国 BIO-RAD；转印槽（美国BIO-RADMini Trans-Blot®Cell）；NanoDrop微量核酸定量仪（Thermo Fisher Scientific，Inc）；荧光定量PCR设备（美国伯乐IQ5）。

TransScript All-in-One First-Strand Cdna Synthesis Super Mix for qPCR试剂盒、TransStar Top Green qPCR SuperMix试剂盒（均北京全式生物技术有限公司）引物合成（由南京金斯瑞生物科技有限公司提供）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（北京诺博莱德科技有限公司）；Blue Plus II Protein Marker（14KDa-100KDa）、Anti-β-actin Mouse Monoclonal Antibody、Goat Anti-Rabbit IgG（H＋L），HRP Conjugate、Goat Anti-Mouse IgG（H＋L），HRP Conjugate（均北京全式生物技术有限公司）；NGF beta Rabbit Monoclonal Antibody（美国 EPITMICS公司）；ECL Plus荧光检测试剂盒（MILLIPORE）；Rabbit Anti-NGF一抗、兔源二抗IgG－兔免疫组化试剂盒SABC即用型、DAB显色试剂盒（均武汉博士德生物工程有限公司）。

1.3 TBI模型制备 术前禁食8h。实验时腹腔内注射2%的戊巴比妥钠（75mg／kg）进行麻醉，俯卧位固定于脑立体定向仪上。消毒皮肤，正中切开，剥离骨膜 ，暴露右顶骨，用微型磨钻在冠状缝后3mm、中线右旁2.5mm处钻一直径为2mm的骨窗，保持硬膜完整。……