陈海强 唐柳生

341例AIDS合并肺结核患者痰液两种方法培养及其药敏分析

陈海强 唐柳生

目的 探讨AIDS(艾滋病)合并肺结核患者痰液两种方法培养及其耐药情况。方法 采集患者痰液分别采用BacT/ALERT3D系统和罗氏法进行结核分枝杆菌的培养及药物敏感性测定。结果 341例AIDS合并肺结核患者痰液两种方法检测,共129例培养阳性,总阳性率39.81%,3D法培养污染率为2.6%,罗氏法培养污染率为2.3%。129株菌株药敏测定结果有40株出现耐药,耐药率为31.01%。结论 3D法在AIDS合并肺结核患者痰液培养方面较罗氏法阳性率高,两种方法相互结合更能提高培养效率。AIDS合并肺结核患者痰液结核菌培养和药敏实验可为临床诊断和指导用药提供重要依据。

AIDS合并肺结核；结核分枝杆菌；3D法；罗氏法；痰液

艾滋病和结核病是目前世界范围内流行最为严重的两种传染病,二者相互影响,相互因果促进病态的进展和恶化［1］。由于艾滋病患者免疫功能低下,很容易引起各种器官发生结核病变,以肺结核最为常见。本文通过采集341例AIDS(艾滋病)合并肺结核患者痰液分别采用BacT/ALERT3D系统和罗氏法进行结核分枝杆菌的培养及药物敏感性测定。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 341例标本均来自2012年2～11月到广西壮族自治区龙潭医院就诊的AIDS合并肺结核患者的痰液,其中男244例,女97例,年龄为8～95岁。

1.2 仪器 法国生物梅里埃公司提供的BacT/ALERT@ 3D(以下简称3D)微生物检测系统。3D培养基由法国生物梅里埃公司提供；罗氏培养基和pH 6.8的磷酸盐缓冲液、消化液等相关试剂均为本室按《结核病诊断细菌学检验规程》配制。

1.3 AIDS的诊断标准 艾滋病的诊断标准参照美国疾病控制中心1993年修订的艾滋病的诊断标准及中国《HIV/AIDS的诊断标准和防止原则》［2］。

1.4 方法 先用消化液将痰液标本进行消化15 min后加缓冲液中和,3000 r/min离心取沉淀分别接种于1瓶3D培养基(接种量为0.5 ml)和1支罗氏培养基(接种量为0.2 ml)。3D培养基用3D系统培养,按说明书操作,阳性立即转种到罗氏培养基,阴性42 d发阴性报告；罗氏培养基置于37℃的孵育箱进行培养,阳性用含各种药罗氏培养基管进行药敏试验,阴性56 d发报告。药敏采用绝对浓度间接法,28 d看结果,含药培养基上生长的菌落数＞20个判定为耐药,质控菌株为H37RV。

1.5 统计学方法 采用Excel2003和SPSS13.0统计软件进行χ2检验。

2 结果

2.1 341例AIDS合并肺结核患者痰液两种方法培养共有129例阳性,除污染例数外,阳性率为39.81%(129/324),其中3D培养阳性106例,占阳性比例的55.50%(106/191),罗氏培养阳性85例,占阳性比例的44.46%；两种方法均阳性85例,有33例罗氏培养阴性3D培养阳性,有11例3D培养阴性罗氏培养阳性。3D法阳性率与罗氏法比较,差异有统计学意义(χ2=8.89,P＜0.01),见表1。

表1 两种方法培养情况

2.2 污染率方面,经萋纳氏抗酸染色确定,3D法培养污染例数9例,污染率为2.6%,罗氏法培养污染例数8例,污染率为2.3%,二者比较,差异无统计学意义(χ2=0.06,P＞0.05)。见表2。

表2 两种方法污染情况比较(n,%)

2.3 对129例阳性菌株进行菌种鉴定和8种药物(异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、利福平、对氨基水杨酸、氧氟沙星、卡那霉素、卷曲霉素)敏感试验,耐药率为31.01%,9株为牛结核分枝杆菌,未出现耐药菌株,109株为结核分枝杆菌,29例耐药(其中有20株同时耐INH和RFP,即耐多药占比18.3%,有10株耐2种药以上,占比9.2%),11株为非结核分枝杆菌,其中有2株对8种药物全部耐药,有11株耐3种药以上。

3 讨论

本组资料显示,3D培养阳性106例,阳性率为31.08%,罗氏培养阳性85例,阳性率为24.92%,两种方法均阳性85例,有33例罗氏培养阴性3D培养阳性,二者比较,差异有统计学意义(P＜0.01),二者污染率比较差异无统计学意义(P＞0.05),因此,3D法明显优于罗氏法,尽管3D法培养具备更利于细菌生长的营养及高敏感的检测系统,但有11例3D培养阴性罗氏培养阳性,这可能与某些菌株生长特性有关。不少学者报道［3］,3D法培养结核杆菌无论是初分离、药敏试验还是菌型鉴定所需时间以及阳性分离率均优于传统罗氏培养法,这是由于分枝杆菌在生长过程中会产生二氧化碳, 3D系统利用此原理通过比色计传感器和反射光连续自动监测培养瓶底的二氧化碳变色指示剂的颜色变化来显示培养瓶内是否有菌生长,灵敏度相当高,而改良罗氏培养基法,只有在大量分枝杆菌生长形成肉眼可见的菌落才可判断,少量肉眼无法判断的菌落有可能被忽视；另外3D培养基属于液体培养基,当中添加有酪蛋白、小牛血清主触酶以及油酸等生长因子,营养非常丰富,并且营养成份全方位与分枝杆菌接触,更利于分枝杆菌生长,而改良罗氏培养基主要成份为谷氨酸钠或天门冬素、磷酸二氢钾、硫酸镁、丙三醇、鸡蛋、孔雀绿和水份等,营养成份不及3D培养基,并且营养成份与分枝杆菌单面接触,分枝杆菌对营养的吸收不如3D培养基。此结论在本文报道中得以验证。

污染率方面,3D法培养污染率为2.6%,罗氏法培养污染率为2.3%,造成污染的原因之一可能是跟标本的性质有关,由于标本所含的杂菌量较大或标本凝固无法打碎,在15 min之内还无法将杂菌杀死；其次是由于实验室污染菌造成,因此,应加强实验过程中的无菌操作。

INH是治疗结核病首先的化学药物之一,它可以被MTB内过氧化氢酶-过氧化物酶激活,作用于enovl-ACP还原酶,抑制细胞壁分枝菌酸的生物合成,造成细胞壁的损坏,使得MTB对外界氧化和侵袭的抵抗屏障受到破坏,从而达到杀灭结核分枝杆菌的作用,但多年来INH耐药率一直居高不下,显著影响抗结核药物的疗效,本文结果显示11株为非结核分枝杆菌,其中有2株对8种药物全部耐药,有11株耐3种药以上,耐药率为100%。上述结果表明AIDS合并肺结核与其他结核病一样,均可获得细菌学的诊断依据,存在着耐药方面的问题,广泛耐药结核造成严重的公共卫生威胁,尤其在艾滋病毒患病率高的人群中和在卫生保健资源少的地方。AIDS合并肺结核病例可以通过痰液结核菌培养和药敏实验结果来诊断和指导临床用药。

［1］ 李拯民.结核菌和HIV双重感染.结核病与肺部肿瘤,2002, 2(2):130.

［2］ 庄玉辉,王国志,翟秉祥.结核病诊断细菌学检验规程.北京:中国防痨协会,1995:31.

［3］ 吴龙章.BacT/ALERT 3D全自动培养仪在细菌鉴定和药敏试验的临床应用.中华检验医学杂志,2002,4(25):243-244.

537006 广西玉林市结核病防治所(陈海强)；广西壮族自治区龙潭医院中心实验室(唐柳生)

唐柳生 E-mail：tls175@163.com