胡继卫, 孙志国, 马 杰, 张景华, 张顺礼, 李文建

(河北省唐山市人民医院 乳腺科, 河北 唐山, 063001)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，死亡率仅次于肺癌，对女性健康构成了极大威胁[1-2]。乳腺癌的发生是一个复杂、多因素、多步骤的病理生理过程，主要涉及癌基因的激活和抑癌基因的失活。本研究通过免疫组织化学SP法检测原癌基因Bmi-1与抑癌基因P16蛋白的表达情况，并进一步研究二者与临床生物学指标ER、PR、HER-2的关系，探讨Bmi-1与P16蛋白在乳腺癌发生发展中可能的作用及临床意义，为乳腺癌靶向基因提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择本院2009年1月—2011年7月病例资料齐全的女性乳腺癌患者标本80例，年龄22～85岁，中位年龄48岁。其中，年龄<45岁38例，≥45岁42例；肿瘤直径≤2 cm 26例，2～5 cm 28例，>5 cm 26例；对癌组织进行组织学分级：Ⅰ级38例，Ⅱ级26例，Ⅲ级16例；根据国际抗癌协会乳腺癌TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期42例，Ⅲ期38例。80例乳腺癌中，有淋巴结转移者42例, ER阳性者47例, PR阳性者44例，HER-2阳性者42例。另取癌旁组织(距癌组织≥5 cm、组织学结构正常)20例为对照组。所有患者术前均未接受化疗、放疗及内分泌治疗。

1.2 方法

1.2.1 Bmi-1表达检测: ① 试剂：兔抗人Bmi-1单克隆抗体(Bmil：D2087XpTM Rabbit mAb)辣根过氧化物酶HRP标记的山羊抗兔二抗分别由美国Cell signaling公司和北京中杉金桥生物技术有限公司提供；DAB显色试剂盒和抗小鼠/兔SABC免疫组化试剂盒分别购自福州迈新生物技术开发有限公司和武汉博士德生物工程有限公司; ② 免疫组织化学染色步骤：所有5 μm石蜡组织标本切片后，采用二甲苯常规脱蜡和梯度酒精水化，使用3%过氧化氢封闭10 min, 灭活内源性过氧化物酶后，应用0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液在pH6.0行15 min微波抗原修复。……