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(1.浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 310014；2.浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100)

左乙拉西坦(Levetiracetam,LEV)，化学名(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酰胺，是作用机制独特的新型抗癫痫类药物[1-2]，目前主要通过化学法制备[3].随着LEV市场需求的增加，越来越多该药物的合成方法被报道[4-5].利用生物法制备手性药物及其手性中间体因具有立体选择性高，专一性强，反应条件温和，环境友好等特点而逐渐成为研究热点[6-8].以生物催化法合成LEV或LEV手性羧酸中间体可弥补化学法存在的不足，为研究者提供了新的思路[9].Tao等报道了通过半理性设计(semi-rational design)获得腈水合酶突变体，用于催化外消旋(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙腈不对称合成LEV，产率和ee值分别为43%和94%[10]，但(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙腈的合成过程中需使用高毒性的2-氯丁腈作为原料.

耐酪氨酸冢村氏菌E105菌株系本课题组从土壤中筛选得到.该菌株可选择性催化(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯不对称水解制备(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸，该手性羧酸经酰胺化后即可制得LEV.笔者所在课题组前期研究中通过对培养基成分筛选和反应条件优化，在10 mL反应体系中实现了(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯的生物拆分，产率和ee值分别达45%和99%[11-12].为进一步提高该菌株的催化能力，有必要对其产酶培养条件进行优化，进而提高其应用潜力，进而为LEV的规模化制备提供依据.响应面法可通过对实验数据的拟合建模，分析评价多因素间的交互作用，并预测最优结果，是适合对多变量体系进行评价和优化的……