通过富集母血浆中胎儿游离DNA无创性产前诊断β地中海贫血*

2014-08-13王青青郝秀兰侯红瑛

中国病理生理杂志 2014年10期

关键词：检测

王青青，张媛，章钧，郝秀兰，侯红瑛

(中山大学附属第三医院妇产科，广东广州 510630)

利用母血浆中胎儿游离DNA，对胎儿单基因遗传病进行无创性产前诊断，是目前产前诊断领域中的研究热点。但是，胎儿游离DNA存在于一个大的母体背景DNA中，在妊娠母体外周血中含量非常少，是目前产前诊断领域研究所面临的一个瓶颈问题。为解决这一瓶颈问题， 2008年Li等[1]首次报道了低变性温度共扩增PCR(co-amplicationatlowerdenaturationtemperaturePCR，COLD-PCR)技术，其可以在大量野生型基因背景中优先扩增少量突变基因，为利用母血浆胎儿游离DNA进行无创性产前诊断单基因遗传病提供了新的技术；2012年Castellanos-Rizaldos等[2]在COLD-PCR技术基础上进行了改进，首次报道了耐受温度-低变性温度共扩增PCR(temperature-tolerantco-amplicationatlowerdenaturationtemperaturePCR，TT-COLD-PCR)技术，降低了COLD-PCR的实验难度，使COLD-PCR技术更有利于用于临床。该技术共包括2种形式：快速耐受温度-低变性温度共扩增PCR(temperature-tolerantfastCOLD-PCR,TT-FAST-COLD-PCR)技术及完全耐受温度-低变性温度共扩增PCR(temperature-tolerantfullCOLD-PCR，TT-FULL-COLD-PCR)技术[1]，目前该技术仅被用于富集外周血中肿瘤来源的游离DNA突变，在无创性产前诊断方面的应用尚无报道[3]。

本研究以广东地区最常见的单基因遗传病β地中海贫血IVS-II-654型及CD41-42型作为切入点进行研究，通过检测母血浆中胎儿游离DNA突变，拟建立一种简便、高效的可富集母血浆中胎儿游离DNA突变的实验平台，评价其在母血浆中富集、鉴定胎儿游离DNA突变的适用范围。