黄阳亮， 钟 祎， 胡景鑫

(1广州医科大学生理教研室， 广东 广州 510182； 2中山大学附属第一医院脊柱外科，广东 广州 510080)

糖尿病性神经痛(diabeticneuropathy,DN)是糖尿病最常见的并发症之一，以肢体末梢的慢性病理性疼痛为主要特点，具体表现为痛觉过敏、痛觉超敏和自发性疼痛[1-2]。目前其机制还不清楚，也无有效的治疗和控制措施。

NF-κB在病理性疼痛的发生发展中起重要作用。各种类型的末梢神经损伤模型大鼠背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)神经元中都有NF-κB的激活[3-4]；用不同方法抑制NF-κB的活化可以明显阻断神经损伤引起的病理性疼痛[5-9]。然而在糖尿病引起的病理性疼痛中，DRG神经元中NF-κB的作用及其机制还有待深入研究。本研究用腹腔注射链脲霉素(streptozocin,STZ)的方法复制大鼠糖尿病模型，痛行为检测方法筛选出现慢性疼痛的动物，检测糖尿病性神经大鼠DRG中p-NF-κB的表达情况，及NF-κB抑制剂对大鼠痛行为的影响并进一步分析其可能的机制。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1动物 Sprague-Dawley雄性大鼠(220～260 g),由广东省实验动物中心提供。动物分笼饲养，自由饮食，室温保持在(24±1) ℃，湿度50%～60%。

1.2主要试剂 STZ (Sigma-Aldrich)溶解于柠檬酸缓冲液(pH 4.5)中，腹腔注射STZ (65 mg/kg)复制大鼠糖尿病模型。NF-κB抑制剂PDTC (Sigma)溶解在0.9% NaCl中配成浓度为5 μmol/L的工作液。免疫组化实验用的Ⅰ抗为兔抗大鼠Nav1.7抗体(Sigma-Aldrich),Ⅱ抗为Cy3标记的驴抗兔IgG (Jackson Immuno Research)。Western blotting实验用的Ⅰ抗为兔抗大鼠p-NF-κB p65 (Ser536) 抗体(Cell Signaling Technology)、兔抗大鼠 NF-κB p65抗体(Cell Signaling Technology)和兔抗大鼠GAPDH抗体(Cell Signaling Technology)，Ⅱ抗为辣根过氧化酶(horseradish peroxidase, HRP)偶联的羊抗兔IgG (Santa Cruz)。

2 方法

2.1大鼠糖尿病模型的制作 柠檬酸2.1 g加入100 mL双蒸水中配成A液，柠檬酸钠2.94 g加入100 mL双蒸水中配成B液，A和B液以1∶1体积比混合，配成pH 4.2～4.5的柠檬酸缓冲液。……