吕 莹，张 栋，张 超，张大方*

(1.长春中医药大学基础医学院，长春 130021；2.伦敦大学学院，英国 伦敦；3.澳门大学，中国 澳门)

附子、干姜是温阳祛寒最常用的药材，源于《伤寒杂病论》的四逆汤，二者相须为用，有增强回阳救逆之功效。通过观察附子干姜以不同比例配伍对急性心衰大鼠神经激素释放的调控作用，进一步探讨附子干姜配伍缓解心衰症状的机理。

1 实验材料

SD大鼠64只，雌雄各半，240～260 g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供(动物许可证号:SCXK-(吉)2007-0003)，饲养条件：室温(22±2) ℃，湿度40%～60%，动物自由进食及饮水，自然昼夜节律。附子(黑顺片)、干姜药材购于长春宏检药业，质量符合《中国药典》2010版一部规定,受试药由本校药剂实验室提取制备。参附注射液(雅安三九药业有限公司生产，专利号：ZL96117458.7，规格:10 mL/支)。戊巴比妥钠(上海爱紫特生物科技有限公司，批号：060719)。乌拉坦(国药集团化学试剂有限公司，批号:T2009081)。NT-proBNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD试剂盒:北京伊普瑞斯科技有限公司。16道生理记录仪MP-150系统(美国Biopac公司)；MP-2003注射泵(上海雷恩医疗器械有限公司)；小动物呼吸机HX-100E(成都泰盟科技有限公司);台式低温高速离心机：GL-21B，上海飞鸽仪器厂；电子天平：JY4001，上海精密科学仪器有限公司。

2 实验方法

2.1 分组 将64只大鼠随机分成8组,即空白对照组、模型对照组、参附注射液阳性对照组、附子提取液组、干姜提取液组、附子∶干姜=1∶0.5组、附子∶干姜=1∶1组、附子∶干姜=1∶2组。

2.2 急性心衰模型的建立 参照文献方法[1]略加改进，20%乌拉坦腹腔注射麻醉，将动物固定在手术台上，进行左心室插管，当显示器上的波形由血压波变成下沿达0 mmHg附近具有明显舒张期而峰顶平坦的波形时表明导管已经通过主动脉瓣进入左室腔内。观察指标：左室内压(LVSP)、左室内压最大上升速率(dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(dp/dtmin)、左室舒张末期压(LVEDP)，记录各组的正常指标后，开胸并连接呼吸机,稳定后股静脉恒速注射1.5%戊巴比妥纳(6 mL/h)，当dp/dtmax降到正常值的20%～40%，稳定后以0.5%戊巴比妥钠4 mL/h保证模型稳定，模型稳定5 min以上即视为心衰模型成功。

2.3 给药 各组大鼠均于十二指肠给予受试药物，阳性对照药舌下静脉注射给药，模型组给予等量的蒸馏水，各组动物均于十二指肠给药后60 min于腹主动脉取血，分离血浆，按试剂盒方法，测定血浆ANP、NT-proBNP、PRA、AngⅡ、ALD的含量。

3 实验结果

造模后，与空白组比较，NT-proBNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD含量均明显升高(P<0.001)。

3.1 血浆NT-proBNP测定结果 给药治疗后，各给药组大鼠血浆NT-proBNP含量均有所降低，尤以附子、干姜1∶0.5组和1∶1组作用最强(P<0.05)。

3.2 心钠素(ANP)测定结果 给药后,ANP含量有所下降。且附子、干姜配伍后，对ANP的调节作用有所增强，其中，附子、干姜1∶2组作用显著(P<0.05),附子、干姜1∶1组作用较强，与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)。

3.3 对急性心衰大鼠肾素—血管紧张素—醛固酮系统的影响

3.3.1 肾素(PRA)测定结果 给药后，各给药组PRA含量均有所下降，其中以附子、干姜1∶0.5组和1∶1组作用显著(P<0.05)。

3.3.2 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)测定结果 给药组与模型组相比,3个配伍组含量均有不同程度的下降(P<0.05)，尤以1∶1组效果显著(P<0.01)。

3.3.3 醛固酮(ALD)测定结果 经治疗后，附子、干姜1∶1组和1∶2组ALD含量下降(P<0.05)，其余各给药组均有不同程度的下降。实验结果详见表1。

表1 血浆NT-proBNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD含量测定结果

注:与模型组比较,#P<0.01,##P<0.05;与空白组比较,△△△P<0.001

4 讨论

附子具有强心、抑制心室颤动，改善学流动力学指标，缓解心衰的治疗作用[2-6]，而在心衰的发展变化中，神经激素的释放也起着重要作用，探讨其与心衰的相关性，有利于更进一步分析附子抗心衰作用的机制。

B型钠尿肽(BNP)是一种在心室中合成的神经激素，它的分泌是在心室压力增高的情况下由preproBNP被酶分解而来，在它生成过程中同时生成了等摩尔量的NT-pro BNP，而由于后者的半衰期较前者更长，所以在血浆中的浓度也较前者更稳定。有研究发现，BNP和NT-proB NP的代谢能直接反映心室的压力，其浓度和心室舒张末期的压力和体积成正比，所以血浆NT-pro BNP水平可能与心衰的严重程度密切相关[7-9]。本研究结果表明,造模后，NT-pro BNP含量明显升高，与空白组比较差异有统计学意义(P<0.001)。给药治疗后,大鼠血浆NT-pro BNP含量与模型组比较均有所降低，尤以附子、干姜1∶0.5组和1∶1组作用最强(P<0.05)。提示附子、干姜配伍后能显著纠正神经内分泌激素释放失衡状态，调节NT-pro BNP的释放作用，而附子、干姜1∶1组及1∶2组NT-pro BNP含量略比附子、干姜1∶0.5组高，则可能由于神经激素激活，模型动物处于代偿调节期。可见，NT-pro BNP可作为反映心脏功能的生物学标志物。

心钠素又称心房利钠因子，它主要是由心房合成、贮存和分泌的一种活性肽[10]，作用于肾、血管平滑肌等靶器官，产生强大的利尿、排钠、扩张血管及抑制肾素和醛固酮作用[11]。研究表明：心钠素与心衰的发生与严重程度高度相关，且心钠素的含量与心功能不全是成正比的。测定血浆ANP可用于判断心衰程度及预测患者的预后情况[12-13]。实验结果表明:给药后，ANP含量有所下降。且附子干姜配伍后，对ANP的调节作用有所增强，尤以附子、人参1∶1组作用最为明显，与模型组比较有显著性差异(P<0.01),说明附子、干姜的强心作用可能与改善ANP的释放有关。

在人体内RAAS是维持水、电解质、血压、内环境稳定的重要体系之一，而在心衰时，除循环RAAS活性上升外，心脏局部的RAAS也激活[14]。RAAS在心力衰竭早期对心功能起到积极的代偿作用,但持久激活使心脏负荷过重导致心功能恶化。肾素(PRA)是由肾近球细胞合成和分泌的一种酸性蛋白酶，血浆中的肾素底物，即血管紧张素原，在肾素的作用下水解为血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)。在血浆和组织中，AngⅠ水解为AngⅡ，AngⅡ可刺激肾上腺皮质球状带合成和分泌醛固酮(ALD)[15]。大量研究表明,心衰患者的PRA、AngⅡ和ALD浓度均增高[16]，且AngⅡ、ALD浓度均明显升高，以AngⅡ升高更稳定，其增高幅度与心衰的严重程度相关,故PRA、AngⅡ、ALD水平能反映心衰失代偿后的严重状态[17-22]。

实验结果表明，造模后,模型大鼠血浆中PRA、AngⅡ、ALD显著上升。表明造模后激活了神经激素的释放功能，使血液中PRA、AngⅡ、ALD的含量增加。给予治疗后,各组均有所改善，尤以附子、干姜1∶1组和1∶2组作用明显(P<0.05)，PRA、AngⅡ、ALD含量降低，提示治疗药对心衰有缓解作用。

综上所述，实验结果提示，附子与干姜按适当比例配伍后可能通过提高心肌功能，反馈调节急性心衰大鼠血浆NT-pro BNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD的含量，从而更好的达到回阳救逆，改善、缓解心功能的作用。

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