吴 菲，杨涵棋，张 耀，杨 馨，周海燕，钟振东，刘旭光

(成都中医药大学，成都 610075)

滑膜炎症是类风湿性关节炎(RA)的关键病理环节，滑膜细胞功能异常在炎症中占据核心地位，并依赖于滑膜细胞内复杂的炎症信号通路进行分子信号传导。其中,NF-κB、MAPK、JAK-STAT通路是细胞内3条重要的信号传导通路，在RA的炎症反应中起着极其重要的作用。前期的实验研究表明，艾灸对实验性RA家兔滑膜细胞MAPK信号通路[1]和JAK-STAT通路[2]的异常激活有明显抑制作用。本实验通过观测不同灸法对RA模型关节滑膜组织NF-κBp65、NF-κBp50、IKK表达的影响，探索不同灸法抗炎作用的NF-κB信号通路机制。

1 实验材料

日本大耳兔40只，体质量(2.5±0.25) kg，雌雄各半，由成都中医药大学动物实验中心提供。动物在实验前适应性驯养1周，分性别按体质量分层随机分组。福氏完全佐剂(Freund’s Complete Adjuvant，FCA)，美国sigma公司生产，购自上海生工。艾绒为中国南阳市东升艾绒厂生产。兔多克隆一抗试剂盒：NF-κBp50(CST，美国)，NF-κBp65(博奥森，北京)，IKK(博奥森，北京)；二抗：1)生物素化山羊抗兔IgG(H+L)；2)生物素化山马抗小鼠IgG(H+L)；三抗:辣根过氧化酶标记链霉素卵蛋白(HRP/A-V)；二抗三抗及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。TSJ-Q型全自动封闭式组织脱水机；切片机(徕卡-2015，德国)；Motic BA400显微摄像系统(麦克奥迪公司)；BMJ-Ⅲ型包埋机、PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威医疗仪器有限公司)；Image-Pro Plus图像分析系统(Media Cybernetics，Inc.)等。

2 实验方法

2.1 实验分组 将40只日本大耳白兔按性别、体质量分层随机分为5组:空白对照组、RA模型组、温和灸治疗组、直接灸治疗组、隔姜灸治疗组，每组8只。

2.2 RA造模 除对照……