李晓梅, 包馨慧， 杨毅宁, 马依彤, 陈邦党， 刘 芬， 李海霞

(新疆医科大学第一附属医院心脏中心， 乌鲁木齐 830054)

2003年Zhao等[1]首次提出缺血后适应(Ischemia postconditioning，IPost)概念，它是一种在再灌注早期，通过快速、反复、短暂中断冠脉血流后，再完全恢复心肌灌注，而起到明显减少心肌梗死范围、抗再灌注心律失常及抗心肌细胞凋亡等减轻再灌注损伤、保护心肌的有效可行的方法[2-3]。目前多项研究显示IPost是减轻急性心肌梗死再灌注损伤可行和最为有效的治疗措施，有着极大的临床应用价值，已成为目前的研究热点[4]。缺血再灌注损伤目前大部分在器官及整体动物水平如离体心脏灌流、活体动物模型上等进行，尤其是国内，尚未见在细胞水平上建立缺血后适应模型进行相关的实验研究报道。本研究进行体外培养新生SD乳鼠心肌细胞，拟在细胞水平建立心肌细胞缺血后适应模型，评价心肌细胞缺血后适应模型对心肌细胞再灌注损伤的影响，为缺血性心脏病的研究及治疗提供基础。

1 材料与方法

1.1实验动物、试剂与仪器选取出生1～3 d的SD乳鼠20只,雌雄不限(由新疆医科大学实验动物中心提供)。DMEM培养基(GIBCO),小牛血清(GIBCO),胰酶(GIBCO)，Ⅱ型胶原酶(GIBCO)，Brdu-5(Sigma)，Hochest33342试剂盒(Sigma),Bcl-2及Bax抗体(Santa，美国)。

1.2心肌细胞培养取SD大鼠心脏,Hanks液中清洗3～4次,去心包膜及心房，将心室肌切碎，加入用D-Hanks配置的0.05%胰酶和0.08%胶原酶 Ⅱ 的混合溶液水浴震荡消化，每次10 min，共8次，每次吸取上清，吹打分散细胞，经滤网过滤后1 000 r/min离心5 min后用培养液重悬，差速贴壁90 min，加入Brdu后将细胞密度调整至(5～6)×105cells/L接种于培养皿中，于5%的CO2、高湿度的培养箱孵育后，24 h后观察细胞存活率，培养48 h后，换无血清培养基培养。……