何利珍+谭小军+张琼+高蔚樱+劳淑贞

[摘要] 目的 研究卵巢癌组织中PTEN蛋白表达与临床病理因素的关系。 方法 运用免疫组织化学的方法检测67例卵巢癌组织，25例良性卵巢肿瘤和10例正常卵巢组织中PTEN蛋白的表达。 结果 在67例卵巢癌组织中有35例为阳性表达，卵巢良性肿瘤有22例阳性表达，正常卵巢组织中均为阳性表达，其间存在显著相关性（P<0.05），PTEN蛋白表达与卵巢癌的的病理分级、临床分期和淋巴结转移存在显著相关性（P<0.05），而与卵巢癌的组织类型无显著相关性（P>0.05）。 结论 PTEN蛋白的阳性表达及表达缺失对于评价卵巢癌的恶性程度、转移及预后有显著的临床价值。

[关键词] PTEN；卵巢癌；免疫组织化学

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）07-17-04

Study of expression of cancer suppressor gene PTEN in ovarian cancer

HE Lizhen TAN Xiaojun ZHANG Qiong GAO Weiying LAO Shuzhen

Department of Pathology， Affiliated Tumor Hospital of Guangdong Medical University， Guangzhou 510095， China

[Abstract] Objective To study the relationship between the PTEN protein expression in ovarian cancer tissue and the clinicopathological factors. Methods The immunohistochemical method was used to detect the PTEN protein expression in 67 cases of ovarian cancer tissue， 25 cases of benign ovarian tumor tissue and 10 cases of normal ovarian tissue. Results Of the 67 cases of ovarian cancer tissue， 35 cases presented positive expression； 22 cases of benign ovarian tumor presented positive expression； All normal ovarian tissue presented positive expression， with significant correlation between them （P<0.05）. The PTEN protein expression had significant correlation to the pathological grading， clinical staging and lymph node metastasis of ovarian cancer （P<0.05）， but had no significant correlation to the histological pattern of ovarian cancer （P>0.05）. Conclusion Positive expression and expression loss of PTEN protein are of significant clinical value for evaluating the malignancy degree， metastasis and prognosis of ovarian cancer.

[Key words] PTEN； Ovarian cancer； Immunohistochemitry

随着医学水平的提高，卵巢癌的诊治取得显著进展，但其5年生存率仍低徊在30%～40%[1]。本研究应用免疫组织化学方法检测PTEN在卵巢癌中的表达，分析PTEN在卵巢癌发生发展中的作用及其对肿瘤分级、分期的影响，为临床早期诊断和治疗卵巢癌提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

病例取自广州医科大学附属肿瘤医院2010年1月～2012年12月住院手术的卵巢癌切除标本共67例，临床资料完整，均为生育后妇女，患者年龄34～74岁，平均51岁，术前未接受过放疗化疗和激素及免疫治疗。

1.2 分级分期

所有病例病理诊断明确，组织学分型依据WHO

分类标准[2]，临床分期依据2000年国际妇产科联盟FIGO制定的标准[3]。67例卵巢癌患者均为初发病例，其中病理类型有：浆液性癌49例，黏液性癌18例；病理分级：高中分化 39例，低分化28例； 手术临床分期：Ⅰ/Ⅱ期43例，Ⅲ/Ⅳ期24例；盆腔淋巴结有转移者21例，无转移者46例。选择同时期良性卵巢肿瘤25例和正常卵巢组织10例分别作为对照，正常卵巢组织为子宫肌瘤患者卵巢切除标本。

1.3 试剂与方法

10%甲醛固定标本，石蜡包埋，4μm厚连续切片，应用EnVision免疫组织化学法检测。即用型鼠抗人单克隆PTEN抗体和PV-9000通用型二步法检测试剂盒等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。所有步骤严格按照试剂盒说明书进行操作。常规石蜡切片脱蜡水化，3% H2O2去离子水孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗2min×3次；滴加10%正常山羊血清，室温孵育10min，消除非特异性染色，滴加1︰100 PTEN抗体，4℃冰箱过夜，次日PBS冲洗2min×3次，滴加聚合物辅助剂（Polymer Helper），室温孵育20min，PBS冲洗2min×3次，滴加辣根酶标记羊抗兔/小鼠IgG多聚体（Poly Peroxidase-anti-Mouse/Rabbit IgG），室温孵育30min，PBS冲洗2min×3次，DAB显色，蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明、封片。以PBS缓冲液置换一抗作为阴性对照，用已知PTEN阳性的切片作为阳性对照。endprint

1.4 结果判断

PTEN蛋白产物表达于胞浆或胞核，胞浆或胞核染色呈黄色或棕褐色者视为阳性细胞，根据阳性细胞百分率和染色程度进行半定量分析。染色强度评分：无色=0；淡黄色=1；棕黄色=2；棕褐色=3。采用高倍视野随机计数500个肿瘤细胞中阳性细胞所占的比例，定位3级，未见阳性表达或阳性细胞数<5%为阴性（-）=0；5%≤阳性细胞<30%为阳性（+）=1；30%≤阳性细胞<60%为中度阳性（++）=2；≥60%的为强阳性（+++）=3。两种评分结果相加后分为4级：0～1分，阴性；2分“+”，弱阳性；3～4分“++”，中度阳性；5～6分“+++”，强阳性（过表达）。

1.5 统计学处理

应用SPSS13.0分析软件对各计数资料进行数据统计分析，各计量资料组间PTEN蛋白表达率比较采用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同卵巢组织中PTEN蛋白的表达

卵巢癌组织中PTEN表达率与正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1、图1～4。

图1 正常卵巢组织中PTEN阳性表达（×400）

图2 卵巢高分化腺癌中PTEN阳性表达（×200）

图3 卵巢中分化腺癌中PTEN弱阳性表达（×200）

图4 卵巢低分化腺癌中PTEN阴性表达（×200）

表1 不同卵巢组织中PTEN的表达

组别 例数 PTEN表达 x2 P

阳性 阴性 阳性率（%）

正常卵巢组织 10 10 0 100 16.122 0.000

良性卵巢肿瘤 25 22 3 88.00

卵巢癌组织 67 35 32 52.24

注：与癌组织比较，P<0.05

2.2 PTEN蛋白表达与临床病理参数之间的关系

PTEN表达率与卵巢癌临床分期、病理类型、病理分级和淋巴结转移之间的关系。见表2、图2～4。

表2 PTEN与临床病理参数之间的关系

比较项 例数 PTEN表达 x2 P

阳性 阴性 阳性率（%）

临床分期 4.915 0.027

Ⅰ/Ⅱ 43 37 6 86.05

Ⅲ/Ⅳ 24 15 9 60.00

病理类型 0.272 0.602

浆液性癌 49 28 21 57.14

黏液性癌 18 9 9 50.00

病理分级 13.151 0.000

高中分化 39 31 8 79.49

低分化 28 10 18 35.71

淋巴结转移 8.787 0.003

无 46 31 15 67.39

有 21 6 15 28.57

3 讨论

PTEN基因是第一个被发现的具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因[4]，既有蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）活性，又有脂质特异性磷酸酶（DSP）活性，不仅能诱导细胞凋亡及抑制细胞有丝分裂，而且作用于细胞生理的多个方面，包括调节细胞的粘附、转移和分化等。

目前PTEN基因与卵巢癌关系的研究相对较少，且结果不尽一致。Kurose等[5]通过对117例卵巢癌进行研究后发现在卵巢癌中有PTEN基因突变发生，但PTEN基因的突变与卵巢癌的发生发展过程之间不存在相关性；De等[6]用免疫组织化学的方法研究232例原发卵巢癌患者的PTEN蛋白表达，结果表明PTEN染色阴性的卵巢癌患者的预后相对良好。还有一些研究发现PTEN杂合性缺失的小鼠可发展为自发性肿瘤，同时PTEN特异性敲除的小鼠亦可相应发生肿瘤，提示PTEN在维护基因组稳定性方面具有非常重要的作用[7-8]。国内也有多人的研究结果提示PTEN与卵巢癌的发生发展密切相关[9-10]。本研究通过免疫组化法检测了67例卵巢癌组织中PTEN蛋白表达情况，结果表明在卵巢癌组织中PTEN 蛋白阳性表达率显著低于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织，正常卵巢组织中PTEN蛋白的阳性表达率是100%，而在卵巢癌中是52.24%，其阳性表达率呈逐渐下降趋势（P<0.01），推测 PTEN蛋白表达可能是正常卵巢组织生长的必要因素之一，而PTEN 蛋白表达下降或缺失有可能使PTEN对肿瘤细胞生长抑制及对凋亡和细胞黏附的控制减弱，使卵巢组织生长失控，从而有助于卵巢癌的发生。

此外，在肿瘤的发生与演进过程中，PTEN基因发挥作用是在早期还是晚期，尚在模棱两可之间[11-13]。本研究发现在卵巢癌组PTEN蛋白表达缺失与临床分期、病理分化程度和淋巴结转移有关，但在卵巢浆液性癌和黏液性癌中的表达比较差异无显著性。PTEN在Ⅰ/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期的阳性表达率分别是86.05%和60.00%，与卵巢癌的临床分期呈负相关，临床分期越晚，PTEN表达缺失越明显；在卵巢癌高中分化组和低分化组，PTEN阳性表达率分别是79.49%和35.71%，分化越差，恶性度越高，PTEN表达水平越低；有淋巴结转移的卵巢癌组织中PTEN蛋白表达率28.57%明显低于无淋巴结转移的卵巢癌组织中PTEN蛋白表达率67.39%。提示PTEN的缺失导致了肿瘤的发生，促进了肿瘤的发展，参与了卵巢癌的恶性演变。由此推测，PTEN的缺失表达可能发生于卵巢癌的晚期。此结果与冯秀梅等研究结果相一致，Christos等[14]的研究结果也提示PTEN蛋白缺失表达可能发生在卵巢癌的晚期。冯秀梅等[15]研究分析了12例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤、12例卵巢交界性肿瘤和80例卵巢上皮癌中PTEN的表达，结果发现PTEN蛋白在上皮性卵巢癌中主要表现为表达缺失，显著低于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织的表达（P均<0.01），而且，临床分期越晚、细胞分化越差，PTEN表达缺失越明显，提示PTEN蛋白丢失现象多在卵巢癌的晚期发生。近年来已有大量的研究证实PTEN能够诱导卵巢癌细胞的凋亡和抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭[16-18]，由此可见，PTEN蛋白表达与否能够预示上皮性卵巢癌患者的预后。由于临床分期、组织分化程度与卵巢癌预后直接相关，说明PTEN基因的缺失表达预示肿瘤预后不良，检测卵巢癌患者癌组织中PTEN的表达水平对于评价卵巢癌的恶性程度和估计预后具有重要临床价值。endprint

综上所述，PTEN蛋白的表达高低和失表达在卵巢癌的发病中具有重要作用，可为不同人群中研究卵巢癌的病因、发病学环节提供有用的分子生物学检测指标，同时也可为临床诊断和辅助治疗提供重要依据，可能成为卵巢癌的标记物和评价其预后的指标。

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（收稿日期：2014-02-17）endprint

综上所述，PTEN蛋白的表达高低和失表达在卵巢癌的发病中具有重要作用，可为不同人群中研究卵巢癌的病因、发病学环节提供有用的分子生物学检测指标，同时也可为临床诊断和辅助治疗提供重要依据，可能成为卵巢癌的标记物和评价其预后的指标。

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（收稿日期：2014-02-17）endprint

综上所述，PTEN蛋白的表达高低和失表达在卵巢癌的发病中具有重要作用，可为不同人群中研究卵巢癌的病因、发病学环节提供有用的分子生物学检测指标，同时也可为临床诊断和辅助治疗提供重要依据，可能成为卵巢癌的标记物和评价其预后的指标。

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（收稿日期：2014-02-17）endprint