黄妍，鞠璐宁

摘要：对米曲霉（Aspergillus oryaze）GN-2菌株产中性蛋白酶固体发酵的条件进行优化。单因素试验结果表明，米曲霉的固体适宜发酵条件为发酵原料麸皮∶豆粉为4∶1（质量比，下同），培养时间60 h，培养温度25 ℃，培养基加水量10 mL，接种量1×106个/mL孢子悬液2.0 mL，培养基起始pH 6.0，0.02%（NH4）2SO4溶液1 mL。正交试验结果表明，在温度25 ℃、加水量20 mL、麸皮∶黄豆粉为4∶1、培养时间72 h的条件下酶活力最高，达1 016.9 U/g。

关键词：米曲霉（Aspergillus oryaze）；中性蛋白酶；产酶条件

中图分类号：TQ925；Q93-33 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）07-1637-04

Optimizing the Solid Fermentation Conditions of Neutral Protease from

Aspergillus oryzae GN-2 Strain

HUANG Yan，JU Lu-ning

（Minbei Vocational and Technical College， Nanping 353000，Fujian，China）

Abstract： The optimal solid fermentation conditions of neutral protease from Aspergillus oryzae GN-2 strain was studied. The results of single factor test showed that the highest neutral protease activity was obtained under the conditions of wheat bran and soybean powder addition ratio 4∶1， fermentation time 60 h，temperature 30 ℃，water addition 10 mL， inoculum amount 2.0 mL 1×106 spores/mL spore suspension， the initial medium pH 6.0，0.02%（NH4）2SO4 1 mL. The results of orthogonal experiment showed that the highest neutral protease activity was obtained when the solid fermentation was carried out at 25 ℃ for 72 h， water addition 20 mL and the addition ratio of wheat bran and soybean powder 4∶1， with the highest neutral protease activity of 1 016.9 U/g.

Key words： Aspergillus oryzae； neutral protease； enzyme production conditions

中性蛋白酶是指最适作用pH介于6.0～7.5的一类蛋白酶，能催化蛋白质肽键水解。它是最早发现并广泛应用于工业生产的蛋白酶制剂，被广泛应用于皮革脱毛、饲料加工、畜禽血液蛋白质水解、酒和饮料的澄清以及医药治疗等领域[1-3]。

米曲霉（Aspergillus oryaze）具有丰富的蛋白酶系，能产生酸性、中性和碱性蛋白酶，能耐受较高温度，广泛地应用于食品、医药及饲料等工业中[4]。米曲霉易于固体培养，所产的中性蛋白酶热稳定性高，有利于酶制剂的制作和保存，培养原料来源广泛，价格便宜，用于食品行业和化妆品行业将有广泛的前景[5]。吴继星等[6]研究表明，微生物培养基组成与产酶有极大的相关性。近年来，研究者采用正交设计的方法对培养基组分和培养条件进行优化筛选，并取得一定成效[7]。

本研究从酿造酱油曲精中分离到一株米曲霉菌株，命名为GN-2，研究了培养条件对米曲霉GN-2产中性蛋白酶的影响，通过正交试验确定了其中4个影响因素的最优组合，为该菌株的开发利用奠定了基础。……