贾晨光，李秀武，姚黎明*，刘建强，黄 俊，陈银芳，张 雷

（1.河北省胸科医院骨科，河北 石家庄 050041；2.武汉海吉力生物科技有限公司，湖北 武汉 430075）

干扰素γ释放试验诊断肺外结核的应用价值

贾晨光1，李秀武1，姚黎明1*，刘建强1，黄 俊2，陈银芳2，张 雷2

（1.河北省胸科医院骨科，河北 石家庄 050041；2.武汉海吉力生物科技有限公司，湖北 武汉 430075）

目的 比较干扰素γ释放试验（interferon gamma release assay，IGRA）与结核菌染色涂片、结核菌培养、结核菌素试验（tuberculin skin test，TST）在肺外结核诊断中的敏感性，探讨IGRA方法在肺外结核中的应用价值。方法 采集75例经临床诊断为肺外结核病患者的新鲜外周血，将IGRA检测结果与传统的检测方法（结核菌染色涂片、结核菌染色涂片培养、TST）的检测结果进行比较。结果 75例肺外结核患者中，IGRA检测阳性率为84.0%，结核菌染色涂片（8.0%），结核菌培养（5.3%），TST检测（52.0%），IGRA检测阳性率均明显高于其他临床常用检测方法，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 IGRA试剂检测法诊断肺外结核，敏感性明显高于传统的检测方法，有很好的临床应用价值。

结核；干扰素γ释放试验；诊断

目前结核的诊断方法较多，但检测结果的敏感 性存在较大差距。特别是在肺外结核的临床检测上，该现象更为突出，主要原因之一就是肺外结核缺乏肺部病变的特点，病变的部位多隐匿，临床症状不明显［1］，且结核分枝杆菌培养时间长，敏感性低，以致临床上经常误诊和漏诊。国内目前肺外结核的诊断方法主要有影像学结合结核分枝杆菌涂片、培养及结核菌素试验（tuberculin skin test，TST）等。结

核分枝杆菌的涂片简单，但敏感性和特异性不高。结核菌培养耗时较长，容易延误病情的诊治。TST是一种较古老的检测方法，存在特异性不高等难以克服的缺陷。近年来，干扰素 γ释放试验（interferon gamma release assay，IGRA）作为一种新型的检测方法逐渐被各大医院及检验单位所接受。这类试验采用酶联免疫吸附和（或）酶联免疫斑点方法定量检测全血和（或）外周血单核细胞在结核杆菌特异性抗原刺激下释放干扰素γ的水平，用于诊断结核分枝杆菌感染及结核病。该检测方法及其相关试剂盒已被美国食品药品监督管理局批准用于临床，疾病预防控制中心为其制定了使用指南［2－3］。而且该方法在诊断活动性结核方面具有很高的敏感性［4］。本研究对75例经临床影像学和组织学确诊为肺外结核的患者进行菌检、TST及IGRA方法检测，旨在探讨各种方法在肺外结核诊断中的敏感性。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2013年1—5月肺外结核病患者75例（河北省胸科医院18例，武汉市医疗救治中心31例，北京老年医院26例），均依据临床表现、体征、细菌学、影像学、病理或抗结核治疗有效明确诊断为肺外结核病，男性46例，女性29例，年龄18～67岁，平均（38.0±16.4）岁。其中结核性脑膜炎 7例，结核性腹膜炎10例，淋巴结结核5例，肾结核5例，关节结核16例，脊柱结核32例。

1.2 主要试剂及仪器：恒温水浴锅，结核菌纯蛋白衍生物，抗酸染色液，结核杆菌培养基，结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒（武汉海吉力生物科技有限公司研制）。

1.3 方法

1.3.1 结核菌染色涂片：取患者晨痰，均匀涂布于盖玻片上（略厚），干燥固定后滴加石碳酸复红染色8～10min，3%盐酸酒精脱色1～2min，脱色时轻摇玻片，直到图片颜色脱去为止，流水冲洗后用碱性美蓝染液复染30s，流水冲洗，待干后用显微镜油镜观察细菌的染色性和形态。

1.3.2 结核菌培养：取患者晨痰，向痰标本中加入1～2倍体积的 4%NaOH，涡旋振荡 1min，静置15min后取0.1mL处理标本样于培养基斜面，置于37℃恒温培养箱培养，接种后3d、7d观察，此后每周观察1次，有菌落生长后用抗酸染色验证，若同时为阳性记录为阳性，否则为阴性，至第8周仍无细菌生长记录为阴性。

1.3.3 TST：取0.1mL药液（含结核菌素纯蛋白衍生物 5U）注射于受试者前臂掌侧皮下，48～72h后检查注射部位反应，测量并记录硬结的平均直径，＜5mm者为阴性，5～15mm者为阳性，＞15mm或者注射部位出现丘疹、水泡、溃烂、坏死者为强阳性。

1.3.4 IGRA检测：受试者用BD肝素锂抗凝采血管抽取5mL静脉血，即刻轻柔颠倒混匀3～5次，使抗凝剂充分溶解。3h内将采集的全血分装到3种不同的培养管中，“T”为添加了结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10的测试培养管，“N”为本底对照培养管，“P”为添加了非特异刺激原植物血凝素的阳性对照培养管，每种培养管分装 1mL，分装前需要颠倒混匀3次以上，分装后轻柔颠倒培养管 5次并立刻置于 37℃培养箱中，静置培养（22±2）h后取出，离心收集上清液，然后用双抗体夹心法定量检测上清中干扰素γ的含量，最后计算刺激培养系统中特异性升高的干扰素γ的量来判定是否为结核杆菌感染阳性。

1.4 统计学方法：应用SPSS13.0软件对数据进行处理。计数资料以百分率表示，采用配对χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

IGRA、结核菌染色、结核菌培养、TST检测肺外结核的阳性率分别为 84.0%（63／75）、8.0%（6／75）、5.3%（4／75）、52.0%（39／75）。IGRA检测阳性率明显高于其余3种方法，差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 4种检测方法诊断肺外结核的结果比较Table 1 The results of four test methods for extrapulmonary tuberculosis （n）

3 讨 论

近年来结核病疫情呈明显上升趋势，全球所有传染性疾病中，结核病已成为成年人的首要死因。我国是全球22个结核病高负担国家之一，是世界上仅次于印度的第2结核病大国，中国第四次全国结核病流行病学调查显示活动性肺结核患病率为367／10万，菌阳肺结核患病率为 160／10万，涂阳肺结核患病率为 122／10万［5］。

肺外结核是指发生在肺部以外的全身其他脏器的结核病。国外资料显示肺外结核占结核病的25%～30%，在中国占结核病的9.7%～11.8%，病死率占 14.1%～17.6%［6－7］。目前诊断肺外结核仍存在很多困难，主要原因是肺外结核变化大，临床表现复杂，缺乏特异性的表现。结核菌培养是诊断结核的可靠依据，但常规培养需要2个月的时间，快速培养也需要1周，而且阳性率取决于采集标本中细菌的数量。本研究中抗酸染色方法的阳性率为8.0%（6／75），结核菌培养方法的阳性率只有5.3%（4／75），可能与采集标本的质量有关；影像学作为辅助诊断方法，由于其使用的局限性，对肺外结核诊断存在较大困难；TST是临床常用检查结核的免疫学方法，虽然操作简单，观察结果方便，但由于TST中使用的纯蛋白衍生物的某些抗原成分与卡介苗和环境中的非结核分枝杆菌的抗原成分相同，易于发生交叉反应，使得其有较高的假阳性和假阴性，对临床结核病的诊断意义不大。本研究中TST虽然比结核菌染色和结核菌培养的阳性率要高，但仍然很难满足临床诊断的需求。IGRA作为一种新的酶免疫检测方法，其应用的原理是，机体感染结核分枝杆菌后，体内会产生特异性的效应 T淋巴细胞，其在体外再次受到结核菌特异性抗原的刺激时，会释放干扰素γ，通过检测干扰素γ的水平或计数分泌干扰素γ的数量，从而判断机体是否感染结核分枝杆菌，辅助诊断结核病。由于 IGRA方法选择的特异性抗原只存在于结核杆菌，且在是卡介苗和大多数非结核杆菌中普遍缺失的RD1区基因片段所表达的蛋白，因此，IGRA方法检测的阳性率会明显高于TST［8］。本研究中IGRA阳性率远远高于其他3种检测方法。

筛选结核杆菌的潜伏感染是IGRA的主要应用领域，但IGRA在肺外结核中的应用相关报道却不多，原因可能是肺外结核病例比较难收集。本研究75例患者是由全国在结核诊断方面有较好成就的3家医院共同收集的，虽然病例数并不很多，还不能全面充分满足统计学分析的要求，但本研究体现出来的IGRA技术优越性，值得以后进一步探索。在肺外结核的诊断中，痰结核杆菌检测方法在诊断中出现了极大挑战，一方面是因为肺外结核活动性结核的并发症出现情况并不多，难以通过痰菌检测来判断；另一方面是因为痰菌检测的检出率本身并不高。目前肺外结核的主要辅助诊断技术为TST，但由于其接种抗原的选择一直沿用年代较久的纯蛋白衍生物，在应用中存在明显缺陷，因此急需进行改良，而改良该技术可能会需要较长时间，在这段时间里选出一种拥有较高敏感性的肺外结核诊断方法刻不容缓。

本研究结果表明IGRA方法是能够满足临床应用需求的，但考虑到检测费用较高的原因，推广该方法可能还需要一定时间。

［1］YOON HJ，SONG YG，PARK WI，et al.Clinical manifestation and diagnosis of extrapulmonary tuberculosis［J］.Yonsei Med J，2004，45（3）：453－461.

［2］MAZUREK GH，JEREB J，LOBUE P，et al.Guidelines for using the QuantiFERON-TB gold test for detecting Mycobacterium tuberculosisinfection.United States［J］.MMWR Recomm Rep，2005，54（RR-15）：49－55.

［3］LALVANI A.Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century：new tools to tackle an old enemy［J］.Chest，2007，131（6）：1898－1906.

［4］DIEL R，LODDENKEMPER R，NIENHAUS A.Evidencebased comparison of commercial interferon-gamma release assays for detecting active TB：a metaanalysis［J］.Chest，2010，137（4）：952－968.

［5］全国结核病流行病学抽样调查技术指导组.第四次全国结核病流行病学抽样调查报告［J］.中华结核和呼吸杂志，2002，25（1）：3－7.

［6］SIU GK，ZHANG Y，LAU TC，et al.Mutations outside the rifampicin resistance-determining region associated with rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis［J］.J Antimicrob Chemother，2011，66（4）：730－733.

［7］SHARMA SK，MOHAN A.Extrapulmonary tuberculosis［J］.Indian J Med Res，2004，120（4）：316－353.

［8］AHMAD S.New approaches in the diagnosis and treatment of latent tuberculosis infection［J］.Respir Res，2010，11：169.

（本文编辑：赵丽洁）

VALUE OF INTERFERON-GAMMA RELEASE TEST IN DIAGNOSING EXTRAPULMONARY TUBERCULOSIS

JIA Chenguang1，LI Xiuwu1，YAO Liming1*，LIU Jianqiang1，HUANG Jun2，CHEN Yinfang2，ZHANG Lei2
（1.Department of Orthopedics，Hebei Chest Hospital，Shijiazhuang050041，China；2.Department of Wuhan Hygeianey Bioscience Co.Ltd，Wuhan430075，China）

ObjectiveTo compare the sensitivity of interferon gamma release test（IGRA）with suptum smear，sputum culture and tuberculin slcintest（TST）in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis.To investigate the value of IGRA method in extrapulmonary tuberculosis.MethodsFresh peripheral blood samples were collected from 75 patients of clinically diagnosed extrapulmonary tuberculosis.The result wascompared with those of traditional gold standard test methods（sputum smear and sputum culture，TST），and their clinical application value further were analyzed.ResultsIn 75casesof extrapulmonary tuberculosis，the positive rate by IGRA reagent test was 84.0%，sputum smear 8.0%，sputum culture 5.3%，TST test 52.0%.The positive rate of IGRA was significantly higher than those of other common methods，and the differences were statistically significant（P＜0.01）.ConclusionIn the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis，the sensitivity of IGRA reagent is significantly higher than those of the traditional test methods，IGRA has a good clinical value.

tuberculosis；interferon-gamma release tests；diagnosis

R52

A

1007-3205（2014）10-1129-03

2014－06－04；

2014－08－22

河北省科学技术研究与发展计划项目（12277754）

贾晨光（1975－），女，河北唐县人，河北省胸科医院副主任医师，医学硕士，从事骨科疾病诊治研究。

*通讯作者。E-mail：yaolm24＠126.com

10.3969／j.issn.1007-3205.2014.10.004