郑鸣,王老七,边传周,王永芬

（河南牧业经济学院生物工程系,河南郑州450011）

猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株ORF4的克隆及原核表达

郑鸣,王老七,边传周,王永芬

（河南牧业经济学院生物工程系,河南郑州450011）

根据GenBank数据库中猪圆环病毒Ⅱ型的基因组序列设计引物,采用PCR技术从病料基因组DNA中扩增出PCVⅡ河南地方株ORF4基因,全长180 bp,编码59个氨基酸.将该基因克隆至载体pGEX-4T-3中形成pGEX-4T-3-ORF4表达载体.经PCR、酶切和测序鉴定后,转化表达菌株BL21（DE3）诱导表达.SDS-PAGE结果显示：ORF4能够在大肠杆菌中表达,产物的分子量约为32 kD,且以包涵体形式存在.Western Blot检测结果显示,纯化后的ORF4蛋白能够与鼠抗6×His标签单克隆抗体发生特异性反应,为进一步研究PCVⅡORF4蛋白的特性与功能奠定了基础.

猪圆环病毒Ⅱ型；ORF4基因；原核表达

猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV）是一种无囊膜单链环状负链DNA病毒[1],分为2个血清型：PCVⅠ和PCVⅡ,其中PCVⅡ具有致病性,是一种重要的病原微生物,能够引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）和增生性坏死性肺炎（PNP）等多种疾病[2-4].由于PCVⅡ在我国猪群普遍存在以及持续感染而引起猪群免疫抑制,PCVⅡ与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）等病原体混合感染的现象严重[5],给我国养猪业造成了巨大危害,影响了养猪业的健康发展.

序列分析表明,PCVⅡ基因组全长约1.7 kb,存在11个潜在开放读框（ORF1～ORF11）.其中,ORF1编码参与病毒复制Rep蛋白,与PRRSV共感染中发挥重要作用[6-7]；ORF2编码病毒的衣壳蛋白Cap,是PCVⅡ主要致病基因,可诱导免疫保护,是基因工程疫苗研制的主要候选基因[8-10]；……