周 寅

(宁波市江北区畜牧兽医站，浙江宁波315021)

免疫抗体检测是防控高致病性禽流感的重要手段，蛋鸭在产蛋期间对采血反应敏感，易造成养殖户的经济损失。因此，采用卵黄替代血清有着重要的临床意义。

研究表明，卵黄通过制备进行HI 试验可以检测禽流感疫苗免疫抗体水平，且制备方法有多种。本研究试用氯仿、PBST、PBS、生理盐水等4 种不同试剂制备卵黄样品，在相同条件下进行禽流感HI 试验，并与对应血清进行比对，从而确立一种适用于基层，准确、简单，便于大样本操作的制备方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

禽流感H5 Re-6 亚型抗原和标准阳性血清:由哈尔滨某生物技术开发公司生产，批号为20130218。

供试用卵黄及血清:从宁波市江北区某种鸭场选取个体差异不显著的产蛋鸭20 羽，180日龄，经H5N1 禽流感疫苗三次免疫，单羽笼养，收集鸭蛋40枚;同时采集对应鸭的静脉血，分离血清，对应编号。

试剂:1%鸡红细胞悬液;氯仿(分析纯)，购自宁波化学仪器厂;PBST(pH 7.2)、PBS(pH 7.2)、生理盐水(0.9%)，实验室配制。

其他用品:96 孔V 型微量板，无菌采血器、烧杯、微量振荡器、5 mL U 形管，定量移液器。

1.2 试验方法

1.2.1 不同制备方法卵黄HI 抗体效价比较

氯仿萃取法:1 mL 卵黄加入1 mL 生理盐水，充分混合后加入2 mL 氯仿，充分振荡，静置1 h，然后1500 r/min 离心10 min，取上清液备用。

PBST 直接稀释法:1 mL 卵黄加入1 mL PBST，充分振荡混匀后备用。

PBS、生理盐水处理法:同PBST。

将同一编号经四种不同方式处理的卵黄样品和对应血清，在相同条件下参照《GB/T 18936－2003高致病性禽流感诊断技术》规定的血清HI 方法进行检测，观察样品性状和非特异性凝集情况，并对实验结果进行统计分析。……