曹 翠,宋瑞清

(1.渭南师范学院数学与信息科学学院,陕西渭南 714099;2.东北林业大学林学院,哈尔滨 150040)

2株蓝变菌的生物学特性测定和抑菌药剂的筛选

曹 翠1,宋瑞清2

(1.渭南师范学院数学与信息科学学院,陕西渭南 714099;2.东北林业大学林学院,哈尔滨 150040)

通过对2个云杉八齿小蠹伴生蓝变真菌的试验研究,结果表明：2个蓝变菌菌株适宜生长温度均为25℃;对酸碱度的适应能力强,在pH值为4.0～9.0范围内均能生长,在酸性环境下发育较好;以葡萄糖和果糖为最佳碳源,最佳氮源为甘氨酸,此外菌株Ophiostoma penicillatum 1也可很好利用酵母粉.甲基托布津、扑海因对2个试验菌株的生长有极强的抑制效果,百菌清和中生菌素仅对Ophiostoma penicillatum 2有很强的抑制效果,可杀得和硫酸链霉素对所有菌株的抑制作用均不明显.

云杉八齿小蠹;蓝变菌;生物学特性;抑菌药剂筛选

0 引言

云杉八齿小蠹(Ips typographus Linnaeus)是危害天然云杉林的次期性害虫,主要危害树干基部至树梢部,在蛀干部位严重蛀食树干韧皮组织,破坏养分正常输送[1].在寄主、环境、气候等适宜的条件下,云杉八齿小蠹可造成成片森林毁灭,导致严重损失,其一直是我国北方针叶树危险性害虫之一[2].

云杉八齿小蠹与许多真菌存在着密切的内在联系.科学家已从被云杉八齿小蠹致死的云杉边材中分离出几种能引起蓝色污斑的真菌.其中包括长喙壳属(Ceratocystic)的若干种类[3].有研究报道云杉八齿小蠹携带Ceratocystis polonica,Ophiostoma bicolor和Ophiostoma penicillatum[4].故本研究对2个云杉八齿小蠹伴生蓝变菌株进行试验,测定生物学特性并了解蓝变菌株的生物、生态及营养习性,筛选对伴生真菌防治效果明显的抑菌药剂,为以后深入研究致病机理提供可靠依据,为防治木材蓝变及解释云杉八齿小蠹与真菌之间的关系提供理论基础.

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

蓝变菌株：试验菌株分离自黑龙江丰林国家级自然保护区内云杉八齿小蠹坑道内,经分离鉴定确认为Ophiostoma penicillatum 1,Ophiostoma penicillatum 2[5].

培养基：改良PDA培养基.

化学抑菌药剂：共10种(见表1).

表1 试验用抑菌药剂及使用浓度

腐霉利(50%可湿性粉剂)10.1氢氧化铜(可杀得)(53.8%干悬浮剂)1.150.115硫酸链霉素(72%可溶性粉剂)10.1烯酰吗啉(50%可湿性粉剂)20.2霜霉威(72.2%水剂)20.2扑海因(50%可湿性粉剂)1.3510.1350.1噻菌铜(20%悬浮剂)3.350.335

1.2 试验方法

将供试菌株接种在改良PDA培养基中,置25℃恒温培养6 d.

(1)生物学特性测定

生物学特性[6-9]研究主要包括：菌丝生长的最适温度、pH、碳源和氮源.试验采用菌饼法,菌株菌丝体生长测定采用生长速率法.[10]

(2)抑菌药剂的筛选

10种抑菌药剂对2个蓝变菌株的抑菌活性大小的测定采用室内生长速率法.[11]

试验方法：用直径10 mm的打孔器分别切取在PDA综合培养基上培养好的伴生真菌菌落,分别接入不同处理的PDA平板培养基中央(PDA培养基与2 mL配制好的药液配制的培养基),每处理设3次重复,以不加任何抑菌药剂的PDA平板培养基为对照.置于生化培养箱中25℃下暗培养,每12 h用十字交叉法测量菌丝生长直径.描述菌株在不同杀菌剂中菌落的性状,分析各种杀菌剂对伴生真菌的抑制效果.

1.3 杀菌剂抑菌效果计算

2 试验结果与分析

2.1 温度对菌株菌丝生长的影响

2个测试菌株在试验温度范围内均可生长(图1).2个菌株菌丝生长最适宜温度均为25℃,25℃下培养6 d供试菌株O.penicillatum 1和O.penicillatum 2菌落生长直径分别达到8.5 cm和8.3 cm.15℃～30℃范围内菌株O.penicillatum 1生长较快.

图1 菌株菌丝在不同温度下的生长情况

2.2 pH对菌株菌丝生长的影响

2个菌株在测试pH值范围内均能生长.但是,在不同的pH培养基中生长差异较大(图2).2个菌株均在pH值为5.5时生长最好;2个菌株在pH值为8.0和9.0的培养基上生长均弱,菌丝匍匐,菌落稀疏. 2个菌株在测试pH值范围内影响差异不大.

图2 菌株菌丝在不同pH培养基中的生长情况

2.3 碳源对菌株菌丝生长的影响

2个菌株均在以葡萄糖和果糖为碳源的培养基上生长最好(图3).生长6 d菌株O.penicillatum 1的菌落直径分别达到8.45 cm和8.18 cm,菌株O.penicillatum2的菌落直径分别达到8.35 cm和8.5 cm;菌株O.penicillatum 1在以山梨醇为碳源的培养基上生长较好,菌株O.penicillatum 2在以乳糖为碳源的培养基上生长较好,生长6 d菌落直径为8.18 cm;生长6 d以甘露糖、木糖和甘露糖为碳源的培养基上生长次好.无碳源培养基对2个菌株的生长影响最大,菌丝稀疏.菌株O.penicillatum 2在无碳源培养基上菌落直径虽大于在木糖的,但是菌丝不是稠密状.综上所述,这10种碳源2个菌株均可以利用.

图3 菌株菌丝在不同碳源培养基中的生长情况

2.4 氮源对菌株菌丝生长的影响

菌株O.penicillatum 1在以甘氨酸和酵母粉为氮源的培养基上生长最好(图4).菌株O.penicillatum 2仅在以甘氨酸为氮源的培养基上生长最好;生长6 d菌落直径均达到8.5 cm.菌株O.penicillatum 1在以天门冬、蛋白胨为氮源的培养基上生长较好,菌株O.penicillatum 2在以硝酸钾、天门冬、谷氨酰胺和酵母粉为氮源的培养基上生长较好,生长6 d菌落直径达到8.0 cm以上;2个菌株均在以酒石安酸为氮源的培养基上生长最差,生长6 d菌落直径分别为5.4 cm和6.3 cm.氮源对2个试验菌株生长的影响差异较小.综上所述,这10种氮源2个菌株均可以利用.

图4 菌株菌丝在不同氮源培养基中的生长情况

2.5 不同抑菌药剂对蓝变菌生长的影响

甲基托布津、扑海因对2个菌株生长均有极强的抑制效果,百菌清、中生菌素和腐霉利仅对O.penicillatum 2有很强的抑制效果(表2).

甲基托布津(0.125 g/L)和扑海因(0.135 g/L)对2个菌株的生长抑制率均达到100%.百菌清(0.125 g/L)对O.penicillatum 2的抑制率也很强,抑制率为100%.浓度为0.335 g/L的中生菌素和腐霉利(0.1 g/L)对O.penicillatum 2的抑制效果较强,抑制率均达97%以上.腐霉利和扑海因(0.1 g/L)对O.penicillatum 1抑制效果较好,抑制率超过85%;百菌清(0.9 g/L)和霜霉威对O.penicillatum 2的抑制效果次好,抑菌率均为85%以上;烯酰吗啉和噻菌铜对蓝变菌株的抑制率介于60%～82%之间;可杀得和硫酸链霉素对所有菌株的抑制效果都很低.

表2 抑菌药剂对蓝变菌株生长的抑制率(%)

3 结论与讨论

本实验2个菌株适宜生长温度为25℃;生长最适pH值为5.5;生长最适碳源为葡萄糖和果糖,菌株O.penicillatum 1最适氮源为甘氨酸和酵母粉,菌株O.penicillatum 2最适氮源仅有甘氨酸.

甲基托布津和扑海因对2个试验菌株的生长有极强的抑制效果,百菌清和中生菌素仅对O.penicillatum 2有很强的抑制效果,腐霉利对2个试验菌株有显著的抑制效果,可杀得和硫酸链霉素对所有菌株的抑制作用均不明显.在防治中应根据这些特点适当地选择抑菌药剂.

综上所述,同种真菌的不同菌株在对药剂的敏感度和抗药性上存在的差异较小,但是酵母粉对菌株O.penicillatum 1的生长最适合,菌株O.penicillatum 2也适应于酵母粉培养基,百菌清和中生菌素对O.penicillatum 2的抑制作用强于O.penicillatum 1,这些差异可能是由于培养基的不同所影响,有待于进一步研究;在病害发生的不同时期和不同程度的危害,应根据具体情况选择使用试验所用药剂.

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【责任编辑 曹 静】

Biological Characteristics of Two Blue-stain Fungi and Screening of Fungicides

CAO Cui1,SONG Rui-qing2
(1.School of Mathematics and Information Science,Weinan Normal University,Weinan 714099,China; 2.School of Forestry,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China)

Two blue-stain fungi associated with Ips typographus were tested and the results show that to two strains of blue-stain fungi,the optimum temperature were all 25℃,and their adaptability to pH were strong.They could grow under pH4.0～9.0,and they grew better in acidic environment.Optimum growth carbon source was glucose and fructopyranose.Optimum growth nitrogen sources were glycine.In addition,Ophiostoma penicillatum 1 could make good use of yeast extract.Mildothane and Iprodione were the most effective fungicides,Chlorothalonil and Zhongshengmycin only has significant inhibitory effect to Ophiostoma penicillatum 2 .

Ips typographus;blue-stain fungus;biological characteristics; fungicides selection

S433

A

1009-5128(2014)15-0030-05

2014-02-18

曹翠(1985—),女,山西朔州人,渭南师范学院数学与信息科学学院教师,农学硕士,主要从事园林绿化植物配置、植物病虫害及防治研究;宋瑞清(1964—),女,黑龙江哈尔滨人,东北林业大学林学院教授,博士生导师,主要从事菌物开发及利用、林木病理学及植物病害防治研究.