陈琴华，熊琳，李鹏，朱军

(湖北医药学院附属东风医院药物分析与筛选研究所，十堰 442008)

气相色谱-质谱法测定白芷中异欧前胡素的含量*

陈琴华，熊琳，李鹏，朱军

(湖北医药学院附属东风医院药物分析与筛选研究所，十堰 442008)

目的 通过气相色谱-质谱联用仪,采用选择监测离子法测定白芷中异欧前胡素的含量。方法色谱柱DB-5MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)石英毛细管色谱柱,样品用CO2超临界流体萃取,萃取液用乙酸乙酯溶解,选择离子监测法定量。结果异欧前胡素在1.33～133.00 μg·mL-1(r=0.998 6)范围内线性良好;平均回收率为100.3%,检测限为0.1 ng·mL-1。结论该方法简便、快速、灵敏度高、结果准确可靠,可以用于测定白芷中异欧前胡素的含量。

白芷；异欧前胡素；萃取法,流体,超临界；色谱-质谱,气相

白芷收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部,来源为伞形科植物白芷[Angelica dahurica(Fisch. ex Hoffm.)Benth.et Hook]的干燥根。白芷为我国传统中药,主治头痛、鼻炎、癣症等疾病。现代药理实验表明白芷中所含的呋喃香豆素具有平喘、降压、抗菌、解痉、光敏、活化交感系激素等多种药理作用[1-2]。已有文献对白芷的化学成分进行了研究,发现白芷中主要含香豆素成分,其中最主要的是氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素,异欧前胡素为评价白芷提取工艺的控制指标之一。目前对异欧前胡素的测定主要采用高效液相色谱(high performance liquid chromatograph, HPLC)法[3-4],由于异欧前胡素具有一定的挥发性,随着质谱的发展,气相色谱-质谱(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)法在中药挥发性成分的定量测定上应用越来越广泛[5-6]。笔者使用GC-MS,采用选择离子检测模式,对白芷中的异欧前胡素进行定量测定。报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 HA220-50-06超临界萃取装置(南通市华安超临界萃取有限公司)；GC-MS-QP2010型气相-质谱联用仪(日本岛津公司),工作站GCMSsolution 2.10,DB-5MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)毛细管气相色谱柱(日本岛津公司)；SK-1型快速混匀器(江苏国华仪器厂)；AS3120超声仪。

1.2 试药 异欧前胡素(isoimperatorin,中国食品药品检定研究院,规格:20 mg,纯度＞98%,批号:110827-200402),供含量测定；白芷药材(西安市中药材公司,批号:20080305),经西安交通大学中药教研室牛晓峰教授鉴定为白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.的干燥根；高纯氦气(昆山普克莱斯实用气体有限公司,纯度≥99.999%)；乙酸乙酯(分析纯,西安化学试剂厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 DB-5MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)毛细管气相色谱柱为分析柱；以高纯氦气为载气,流速2.0 mL·min-1；进样口温度:280℃,进样方式:不分流进样,程序升温:起始温度140℃,保持2 min,以10℃·min-1速率升温至280℃,保持4 min,进样量为1 μL,接口温度280℃,EI源温度200℃,电子轰击能量为70 eV,选择离子监测(选择离子为202),采集延时2.5 min。

2.2 溶液的配制 对照品溶液:精密称取异欧前胡素对照品10.5 mg,置10 mL量瓶中,用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度,作为对照品贮备液。精密吸取1 mL置10 mL量瓶中,用乙酸乙酯稀释至刻度,作为工作液。供试品溶液:取白芷药材5.0 kg,粉碎,过筛孔内径1.00 mm筛,称取药粉,置于5 L萃取釜中。待制冷装置与萃取釜和分离釜加温装置正常工作后,打开压缩泵加压到8 MPa,温度为50℃,调整CO2流速至40～45 kg·h-1循环萃取,分离釜Ⅰ的压强和温度分别为6 MPa、40℃；分离釜Ⅱ的压强和温度分别为5 MPa、40℃,提取3 h后,分取提取物,得白芷超临界提取物,出油率为1.3%。精密称取白芷超临界提取物82.82 mg[5],加入适量乙酸乙酯,超声10 min,定容至10 mL,作为供试品溶液。

2.3 质谱条件 在上述色谱条件下,异欧前胡素对照品进样分析,其全离子扫描色谱图见图1A,在11.5 min对应的质谱图见图1B,经GCMSsolution 2.10软件里的NIST147检索,其为异欧前胡素,相似度达98%。从质谱图可见,其碎片质谱离子有m/z270, 255,215,202,174,145和117。异欧前胡素分子量为270,主要质谱碎片为270(M+),202,174,145,118,89和69,可能的裂解过程为分子离子峰m/z270失去一分子CH3得m/z255碎片离子,而分子离子峰失去C5H8形成基峰离子m/z202,进一步失去CO形成碎片离子m/z174。而从图1-B可见,m/z202和69峰度较高,考虑样品中碎片离子的干扰,选择m/z202作为定量监测离子进行分析。

A.总离子流色谱图;B.质谱图图1 异欧前胡素的GC-MS扫描色谱图A.total ion current chromatogram；B.mass-spectrogramFig.1 Full scan GC-MS chromatogram of isoimperatorin

在上述色谱条件下,图2A为异欧前胡素对照品选择离子代表性GC-MS色谱图,图2B为白芷超临界提取物选择离子代表性GC-MS色谱图,从图2中可以看出,其他杂质对白芷超临界提取物中异欧前胡素的测定无干扰。

图2 异欧前胡素对照品选择离子监测色谱图(A)和样品选择离子监测色谱图(B)Fig.2 Selectiveionmonitoringchromatogramof isoimperatorin standard(A)and sample(B)

2.4 线性关系考察 配制异欧前胡素的一系列对照品溶液,使异欧前胡素浓度为1.33,3.99,13.30, 39.90,79.80,133.00 μg·mL-1,进样1 μL,结果以异欧前胡素的质量浓度(μg·mL-1)为横坐标(X),样品峰面积为纵坐标(Y),得线性回归方程为Y=39 348X-3 769(r=0.998 6),表明欧前胡素在1.33～133.00 μg·mL-1范围内线性关系良好。S/N=3时,测得异欧前胡素的检测限为0.1 ng·mL-1。

2.5 回收率实验 精密量取同一样品适量,共9份,分别加入低、中、高浓度的对照品溶液(异欧前胡素的3个浓度分别为:1.33,13.30,133.00 μg·mL-1)各3份,按供试品溶液的处理方法提取得供试品溶液,进样测定,按外标法以峰面积计算的回收率分别为99.4%, 100.5%,100.9%,其平均回收率为100.3%,RSD为2.12%。

2.6 精密度、重复性和稳定性实验 取对照品溶液,连续进样6次,计算峰面积RSD为2.85%。表明该方法精密度良好。取同一批样品,共6份,分别制成供试品溶液,进样测定,计算峰面积的RSD为2.35%。表明该方法重复性良好。取供试品分别于0,1,2,4,6, 8 h进样测定,计算峰面积RSD为3.02%。说明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 含量测定 按“2.2”项下供试品制备方法制备白芷超临界提取物,用GC-MS法测定异欧前胡素的含量。在超临界提取的挥发油中,异欧前胡素含量分别为5.13%,在白芷中异欧前胡素的含量为0.07%,即0.7 μg·g-1。

3 讨论

笔者首次用GC-MS选择离子监测法测定白芷中异欧前胡素的含量,从色谱图和质谱图可以看出,异欧前胡素的基峰为m/z202,而且采用m/z202对样品进行测定,其专属性较强。因此,笔者在本试验中只选用了一种监测离子(m/z202)对异欧前胡素进行测定。运用GC-MS选择离子监测法,灵敏度高,专一性强,相关系数和回收率符合含量的测定要求,且检测限低(0.1 ng·mL-1),是一种用来测定异欧前胡素的好方法。

超临界萃取法是近年来发展起来的一种新的提取、纯化方法,尤其适用于中草药的提取精制,而且超临界提取所得目标物纯净,无需太多处理就可直接进样,故笔者在本实验中直接用乙酸乙酯溶解进样分析。

[1] 杨小花,胡晓.欧前胡素与异欧前胡素的药理学研究进展[J].南昌大学学报,2012,52(3):95-100.

[2] 张宇洁,张小莉,徐玥.长春七中异欧前胡素的提取方法研究[J].应用化工,2012,41(4):679-684.

[3] 王云龙,杨立志,姜雪敏,等.HPLC测定白芷药材中欧前胡素与异欧前胡素的含量[J].药品鉴定,2011,8(18): 74-75.

[4] 王连国,王欣,孟宪杰,等.高效液相色谱法测定白芷中欧前胡素和异欧前胡素含量[J].现代中西医结合杂志, 2011,20(22):2816-2817.

[5] CHEN Q H,LI P,HE J,et al.Supercritical fluid extraction for identification and determination of volatile metabolites from Angelica dahurica by GC-MS[J].J Sep Sci,2008,31 (8):3218-3224.

[6] 陈琴华,李鹏,张卓,等.气相色谱-质谱联用法测定麝香中麝香酮含量[J].医药导报,2009,28(5):647-648.

DOI 10.3870/yydb.2014.04.022

GC-MS Assay for the Determination of Isoimperatorin in Angelica dahurica

CHEN Qin-hua,XIONG Lin,LI Peng,ZHU Jun
(Institute of Pharmaceutical Analysis and Drug Screening, the Dongfeng Affiliated Hospital of Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,China)

Objective To develop a new method of GC-MS assay for the determination of isoimperatorin inAngelica dahurica.MethodsIsoimperatorin was analyzed quantitatively on the DB-5MS quartz capillary chromatographic column by elective ion monitoring.The sample was extracted by ultrasound in acetic ether.ResultsThere was a good linear relationship in the range of 1.33-133.00 μg·mL-1(r=0.998 6)in isoimperatorin.The average recovery was 100.3%and the detection limit was 0.1 ng·mL-1.ConclusionThe method is convenient,of good sensitivity and accuracy.It can be used to determinate the content of isoimperatorin inAngelica dahurica.

Angelicadahurica;Isoimperatorin;Supercriticalfluidextraction(SFE);Chromatography-mass spectrometry,gas

R282.71;R927.2

A

1004-0781(2014)04-0487-03

2013-06-17

2013-10-25

*湖北省卫生厅青年科技人才基金资助项目(QJX2012-45)；湖北省教育厅科研计划资助项目(D20132106)

陈琴华(1976-),男,湖北荆门人,副主任药师,博士,研究方向:药物分析学。电话:0719-8272348,E-mail：cqh77@163.com。