台凡力 陈民佣

（广东湛江农垦畜牧有限公司，广东湛江 524022）

2013年广东省湛江市规模化猪场PRRSV免疫抗体的监测结果

台凡力 陈民佣

（广东湛江农垦畜牧有限公司，广东湛江 524022）

为了解广东省湛江市规模化猪场中猪繁殖与呼吸综合征的防控状况，2013年对广东省湛江市8个规模化猪场进行猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫抗体的监测。共采集样品血清802份，采用ELISA的方法进行检测。结果显示，2013年4月、8月和12月猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫抗体的合格率分别为88.85%、79.48%和81.75%，抗体离散度分别是39.70%、49.60%和67.95%；全年免疫抗体合格率为83.29%。可见2013年广东省湛江市规模化猪场中猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫抗体合格率虽高，但疫苗免疫效果不理想，防控形势比较严峻。

猪繁殖与呼吸综合征；抗体监测；广东湛江；抗体离散度

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪的一种繁殖障碍和呼吸道炎症的传染病[1]。其临床特征为厌食、发热；母猪繁殖障碍，怀孕期发生大批流产，产死胎和木乃伊胎；仔猪与育成猪发生严重的呼吸道症状及高死亡率。

PRRSV主要侵害猪的巨噬细胞，极易感染和损伤免疫器官，致使机体免疫功能降低，使患病猪极易继发各种疾病。本病1987年首先在美国被发现，1995年侵入我国，1996-1998年在我国养猪业出现流产风暴，2001-2002年在我国南方地区再次流行，给我国的养猪业带来灾难性的打击。PRRS被世界动物卫生组织（OIE）列为B类传染病，我国将其列为二类传染病。目前对该病的控制主要是通过接种疫苗，因此对该病抗体的监控已经成为规模化猪场控制该病的重要措施。为了了解广东省湛江市PRRS的防控状况，笔者于2013年对广东省湛江市8个规模化猪场802份血清进行抗体检测，为该市有效控制PRRS提供了科学依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清来源

2013年4月、8月和12月，分明从广东省湛江市各县市的8个规模化猪场采集共802份血清。要求样品必须来源于经产母猪。

1.1.2 试剂

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒（PRRS X3 Ab），美国IDEXX公司生产。

1.1.3 仪器设备

MK3酶标仪、MK2自动洗板仪、MILLI-Q-A超纯水机、单道微量移液器、多道微量移液器、涡旋混合仪等。

1.2 方法

1.2.1 样品采集

采取随机抽样的方法，每个猪场一次采血不低于30份。血样采集后及时进行常规血清分离，冷冻备检。

1.2.2 抗体测定

取10μL血清，利用猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒进行抗体检测。按照试剂盒说明书上的操作程序进行操作，在630 nm处测定样本以及对照品的吸光度值（OD630）。只有阴性对照的平均OD630小于等于0.150，阳性对照的平均值减去阴性对照的平均值大于或等于0.150时，该检测结果才有效。如果被检样品阻断率大于或等于40%，该样本被判为抗体阳性，即有PRRSV抗体存在；如果被检样品的阻断率小于或等于30%，该样本就被判为抗体阴性，即无PRRSV抗体存在；如果被检样品的阻断率在30%～40%之间，就应在数日后再对该猪只个体进行重测，如果重测结果仍可疑，就使用血清中和试验方法进行确认。

1.2.3 离散度分析

离散度（CV）采用变异系数表示。如果被检猪场PRRSV抗体的离散度小于或等于40%，则认为该猪场PRRSV抗体水平比较整齐，免疫效果比较确实。反之，如果该场的离散度大于40%，则认为该猪场的PRRSV抗体水平参差不齐，免疫效果不理想。

2 结果与分析

2013年广东省湛江市PRRSV免疫抗体的监测结果见表1。

由表1可见，2013年4月监测的PRRSV免疫抗体总体水平较好，免疫合格率高达88.85%。在参与调查的8个场中，其中6个场的免疫抗体合格率都达到90.00%以上。8个场的抗体离散度为39.70%，小于40%。通过以上数据可以判断，这一时期广东省湛江市PRRS的免疫工作比较到位，PRRSV抗体水平比较整齐，免疫效果确实，没有发现PRRSV抗体阻断率S/P≥3.0的样品。在这一时期的监测中，监测结果最理想的是1号和8号规模化猪场，这两个猪场的免疫抗体合格率都达到了100%，并且抗体离散度很低，分别为21.49%和19.24%；最不理想的是3号规模化猪场，免疫抗体合格率只有50%，同时抗体离散度非常高，达到92.22%。

2013年8月监测的PRRSV免疫抗体总体水平一般，免疫合格率高达79.48%。在参与调查的8个场中，其中3个场的免疫抗体合格率都达到90.00%以上。8个场的抗体离散度为49.60%，大于40%。通过以上数据可以判断，这一时期广东省湛江市PRRS的免疫工作成果不够理想，PRRSV抗体水平不整齐，免疫效果不确实，没有发现PRRSV抗体阻断率S/P≥3.0的样品。在这一时期的监测中，监测结果最理想的是2号规模化猪场，这个场的免疫抗体合格率达到了100%，并且抗体离散度很低，为19.94%。在2013年4月监测的最理想的两个场中，1号和8号规模化猪场的抗体水平下降都非常明显。特别是1号场，免疫抗体合格率由4月的100 %下降到53.33%。3号场抗体合格率略有回升，但是仍然不理想，免疫抗体合格率为66.67%，抗体离散度略有下降，为63.22%。

表 1 2013 年广东省湛江市PRRSV免疫抗体的监测结果

2013年12月监测的PRRSV免疫抗体总体水平一般，免疫合格率高达81.75%。在参与调查的8个场中，其中3个场的免疫抗体合格率都达到90.00%以上。8个场的抗体离散度为67.95%，大于40%。通过以上数据可以判断，这一时期广东省湛江市PRRS的免疫工作不够理想，PRRSV抗体不整齐，免疫效果不确实。6个规模化猪场都发现了PRRS抗体阻断率S/P≥3.0的样品。在实际生产中，现有的诊断试剂盒还不能区分野毒和疫苗毒所产生的抗体，但一般认为现有的疫苗干预所能产生抗体的阻断率都小于3.0。因此当样品的阻断率超过3.0时，我们将其判为野毒感染。在这一时期的监测中，参与调查的8个场中有6个场疑似有野毒活动，所以各个规模化猪场的监测结果都不理想。1号规模化猪场免疫抗体合格率虽然达到了100%，并且抗体离散度很低，仅为20.14%，但是其S/P≥3.0的数量达到了25头，占抽样比率的78.13%，因此判断这次检测到的抗体为野毒和疫苗毒共同产生的抗体。另外2号场、6号场的情况和1号场类似，免疫抗体合格率虽高，但是有野毒存在。5号场和8号场虽然没有出现抗体阻断率S/P≥3.0的情况，但是其抗体合格率和离散度都是一般水平。

2013年全年监测的PRRSV免疫抗体总体水平良好，免疫抗体合格率高达83.29%。但是，免疫抗体合格率虽高，但抗体离散度不理想，平均值高达52.42%，高于40%，说明在2013年广东省湛江市对PRRS免疫抗体的人为干预效果不理想，PRRS的防控形势比较严峻。

3 讨论

3.1 抗体依赖性增强作用

PRRS感染的一个重要特点就是抗体依赖性增强作用（Antibody dependent enhancement，ADE），即无论在体内或者体外的试验条件下，PRRSV抗体的存在可介导和加强感染，而不是保护[2]。因此，单单通过血清抗体来评估PRRSV疫苗的免疫效果不科学，但可以通过检测PRRSV N蛋白的抗体水平来监测群体中PRRSV的活跃程度。

例如参与调查的1号场，一年当中抗体变化非常明显，4月时免疫抗体合格率为100%，8月时则下降到53.3%，12月时又重新回到100%，离散度由21.49%上升到69.04%，又重新下降到20.14%。如果该场从4—8月都没有接种疫苗，基本就可以断定1号场内PRRS野毒非常活跃，随时都可能暴发。更细致地又可以分为两个阶段，如果在7、8月都没有接种疫苗，则8月的监测结果说明疑似有野毒干扰，或者疫苗效价衰减比较迅速。如果在8—11月没有接种疫苗，则从12月的监测结果看基本可以断定有野毒干扰。

再如2号场，一年当中免疫抗体合格率变化不大，变化幅度在10%以内，但是抗体离散度变化非常明显，从49.90%下降至19.14%，又重新升至59.04%。如果在4—8月之间接种过疫苗，说明这次接种疫苗的质量非常好，对PRRSV的干扰作用非常有效；如果这期间没有接种过疫苗，基本可以断定是野毒的干扰。如果在8—12月之间接种过疫苗，说明疫苗质量非常差，甚至有散毒的可能；如果没有接种过疫苗，则说明疫苗的效价衰减比较迅速。因此对于PRRSV来说，全年的监控非常重要。

3.2 监测方法

目前临床上监测PRRSV抗体多采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法。国内外很多生物制品厂家都生产检测PRRSV抗体的试剂盒，但是质量参差不齐。钱欢和唐利[2]对市场一些常见的试剂盒做了对比试验，发现美国IDXX公司生产的PRRSV抗体检测试剂盒的重复性和一致性比较高，适用于发病诊断和疫病预警。马超峰等[3]也对市场一些常见的试剂盒做了对比试验，结果是美国IDXX公司生产的PRRSV抗体检测试剂盒具有较高的敏感性和特异性，可以作为检测PRRSV的首选试剂盒。IDEXX的PRRSV抗体ELISA检测试剂盒是用重组的PRRSV抗原包被微量反应板，利用ELISA原理来检测猪血清或血浆中的PRRSV抗体。该试剂盒具有较高的重现性、敏感性和特异性，检测结果可靠。所以笔者认为，本试验对广东省湛江市规模化猪场的检测结果比较可靠。

3.3 样品来源

之所以只选择经产母猪作为样品来源，是因为主要考虑了以下几种因素。

首先是公猪。现在的规模化猪场基本采用人工授精，公猪集中在公猪站，种猪场内饲养的数量极少。同时由于公猪很精贵，饲养管理和免疫工作做得比较到位。一般情况下，公猪的免疫抗体水平要高于母猪群的免疫抗体平均水平，因此公猪的免疫抗体水平不能代表一个猪场的免疫水平。

其次是产房仔猪、保育猪和育肥猪。现在规模化猪场都采用多点式饲养、仔猪单相流动、全进全出的管理模式，一般情况下育肥猪上市前在种猪场只能免疫PRRSV疫苗1～2次。从免疫学的角度考虑，经过1～2次免疫后的动物机体还处于基础免疫状态，免疫抗体还不能达到理想的水平。同时很少有猪场监测母源抗体，并根据母源抗体的消长规律来制定免疫程序，多数都是根据经验给仔猪在15日龄左右首次免疫。在这个时期免疫，母源抗体还处在一个比较高的水平，因此免疫抗体受母源抗体的干扰也会比较严重。而经产母猪一般都经过3次以上的疫苗接种，受母源抗体的影响相对较小。综上所述，产房仔猪、保育猪和育肥猪的PRRSV抗体水平要低于经产母猪的抗体水平，因此它们的免疫抗体水平也不能代表猪场的免疫抗体水平。

最后是后备猪。现在的规模化猪场在引进后备猪的时候，都有一个严格隔离驯化的程序，在隔离驯化的过程中，一般都会加打两次PRRS疫苗，并且做严格的检疫，直到引进后备猪的抗体水平达标，才让它们混群[4]，因此后备猪的PRRSV免疫抗体水平会略高于经产母猪的免疫抗体水平，所以也不能代表猪场的实际免疫状态。只有经产母猪，它们一般都在猪场呆3～5年，每年免疫2～4次，它们的PRRS免疫抗体水平才可以真实反映出一个猪场的免疫水平。

3.4 样品数量

现在规模化猪场母猪存栏相对比较多，一般都超过300头以上，按照常用的10%～20%的采样标准来采样，所需样品数量比较大。笔者选择采用生物统计学的方法来确定样本含量。根据PRRSV抗体检测试剂盒的特异性和敏感性以及检测结果的估计标准差计算，PRRSV免疫抗体检测需要采集的样本数量大约为30份[5]，该数量具有统计学意义，可以代表一个猪场的免疫水平，所以要求所有参与调研的规模化猪场采集35份左右的血清，最少有效血清数量不能低于30份。综上所述，本实验中抽检的样品可以代表和反映广东省湛江市规模化猪场PRRS疫苗免疫的真实情况。

3.5 疫苗选择

目前市场上PRRS疫苗的生产厂家比较多，生产规格也很多。每一种规格的疫苗、每一个厂家的疫苗都有自己的市场。免疫PRRS疫苗后能不能真正地、有效地干预到猪体对PRRSV的反应才是关键。本试验中，通过对广东省湛江市2013年PRRSV免疫抗体的检测发现，不同规格、不同厂家的疫苗所产生的免疫效果相差甚远。因此，建议大家一定要慎重选择疫苗。同时还发现，目前广东省湛江市的规模化猪场在设计PRRS免疫程序时，大多是根据经验或者根据专家教授的推荐来设计，有的猪场甚至很多年都没有变过免疫程序。随着疫苗的生产工艺不断在改进，疫苗免疫效果不断在进步，因此对免疫程序也要做出相应的调整。所以，建议有条件的猪场最好借助实验室检测手段，根据抗体的消长规律，来选择适合自己猪场的PRRS疫苗，完善适合本猪场的免疫程序。

[1]宜长和.猪病学[M].北京:中国农业大学出版社,2010: 146-172.

[2]钱欢,唐利.3种检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA试剂盒的比较[J].猪业科学,2012(10):42-44.

[3]马超锋,孙何云,张轶,等.几种检测猪猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体ELSA诊断试剂盒的对比试验[J].猪业科学,2013(9): 82-83.

[4]芦惟本.后备种猪同化技术[J].养猪,2013(4):113-114.

[5]刘建营,曹长仁,谢水华,等.猪血液的实验室检测及数据分析技术[J].猪业科学,2012(10):36-39.

S858.28

B

1673-4645(2014)09-0040-04

2014-05-05

台凡力（1976-），男，山东菏泽人，硕士，中级兽医师，从事动物疫病实验室检测和综合防控工作