都景芳，刘璋楠，傅 皓，秦啸鸣，宋 辉，王国英＊

（1.河南大学医学院 细胞与分子免疫学实验室，河南 开封 475004；2.河南大学 医学院，河南 开封 475004）

旋毛虫肌幼虫活性鉴别的探讨

都景芳1，刘璋楠2，傅 皓2，秦啸鸣2，宋 辉2，王国英1＊

（1.河南大学医学院 细胞与分子免疫学实验室，河南 开封 475004；2.河南大学 医学院，河南 开封 475004）

目的通过调节温度鉴别旋毛虫肌幼虫的活性。方法人工消化法收集纯净的肌幼虫，将肌幼虫分别置于3种温度下，观察肌幼虫的形态特点。结果4℃时，活肌幼虫虫体蜷曲呈螺旋状，活动力弱；37℃时，活肌幼虫虫体呈屈曲样运动，运动活泼；将肌幼虫置100℃温度时，幼虫致死，幼虫虫体呈C字形或虫体内部结构崩解。结论旋毛虫肌幼虫的活虫在4℃时虫体蜷曲，37℃时虫体运动活泼；死亡虫体呈C字形或虫体内部结构崩解。

旋毛虫；肌幼虫；活性；鉴别

在实验教学和科研中，常用人工消化法［1］收集旋毛虫肌幼虫，检出肌幼虫的数量可以作为宿主感染的指标，收集的肌幼虫也可制作抗原和作为新的感染源［2－4］。由于活肌幼虫才能满足制作抗原和作为新感染源的要求，因此在教学及科研中需要对旋毛虫肌幼虫的活性进行鉴别。有文献［5］报道，用0.3g／L亚甲蓝、亚甲蓝—伊红—硼砂染液和10g／L中性红3种染液能使死亡旋毛虫肌幼虫在1min内着色，活虫则不着色，3种染液能快速鉴别旋毛虫肌幼虫的死活。但若制作抗原和作为新感染源，旋毛虫肌幼虫不能进行染色。我们尝试仅用控制温度的方法快速鉴别肌幼虫的死活，方法简单快捷，旨在便于实验教学和科研。

1 材料和方法

1.1 旋毛虫虫种

引自河南省疾病预防控制中心，用小白鼠传代保种的旋毛虫（Trichinella spiralis）。实验前以肌幼虫转种小白鼠备用。

1.2 肌幼虫收集

将感染30d的小白鼠处死，去头、皮、尾、4爪及内脏，留取全部肌肉。在培养皿中将其剪碎后放入500mL烧杯中，加入人工消化液（胃蛋白酶1g，盐酸1mL，蒸馏水99mL），置于恒温磁力搅拌器上，37℃搅拌2h，待肌肉完全消化后，经过滤、自然沉淀，用无菌生理盐水漂洗3～4次，即可收集到纯净的肌幼虫。

1.3 旋毛虫肌幼虫活性观察

将收集的纯净肌幼虫移入盛有1mL生理盐水的试管中，置于4℃、30min，取出镜下观察；将收集的纯净幼虫移入盛有1ml生理盐水的试管中，置于37℃、30min，取出镜下观察。

1.4 旋毛虫肌幼虫死亡观察

将收集的纯净肌幼虫移入盛有1mL生理盐水的试管中，置于100℃水浴3min，取出镜下观察。

2 结果

2.1 4℃时旋毛虫肌幼虫活性观察

在4℃温度下，活肌幼虫虫体蜷曲呈螺旋状，活力弱，几乎不伸曲；若虫体呈C字形或内部结构崩解则为死亡肌幼虫。见图1。

2.2 37℃时旋毛虫肌幼虫活性观察

在37℃温度下，活肌幼虫虫体呈屈曲样运动，运动活泼；若虫体静止不动且呈C字形或内部结构崩解则为死亡肌幼虫。见图2。

图1 4℃时旋毛虫肌幼虫形态

图2 37℃时旋毛虫肌幼虫形态

2.3 100℃时旋毛虫肌幼虫活性观察

在100℃温度时，肌幼虫死亡，肌幼虫虫体呈C字形或虫体内部结构崩。见图3。

图3 100℃时旋毛虫肌幼虫死亡形态

3 讨论

经观察发现，通过调节温度活肌幼虫和死亡肌幼虫的形态有非常明显的区别：活肌幼虫在4℃时虫体蜷曲呈螺旋状；在37℃时虫体呈屈曲样运动，运动活泼；而死亡幼虫虫体呈C字形或内部结构崩解。

观察旋毛虫肌幼虫活性，用我们介绍的方法同染色法相比较，有以下优点：①费用低，不需要使用染料和配制染液，用生理盐水即可；②只需调节温度，操作简单；③能满足制作抗原和作为新感染源的要求；④虫体轮廓清晰、真实，用于实验教学活体观察，直观、生动，教学效果较好。因此，在科研和实验教学中，用该法观察旋毛虫肌幼虫活性既简便快捷又实用。

［1］王国英.旋毛虫肌幼虫体外生存状况实验研究［J］.中国血吸虫病防治杂志，2009，21（2）：133－135.

［2］毛立群，唐洁，杨静，等.旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原保护性免疫的比较研究［J］.细胞与分子免疫学杂志，2009，25（3）：208－210.

［3］杨晓红，赵华明，汤兆强，等.肌幼虫可溶性抗原免疫小鼠抗旋毛虫感染作用［J］.中国公共卫生，2008，24（12）：1481－1482.

［4］崔晶，王洁，王中全，等.旋毛虫对昆明小鼠最小感染剂量的实验研究［J］.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2008，26（1）：73－74.

［5］沈玉娟，常正山，张永年.旋毛虫死活快速鉴别的实验研究［J］.中国兽医寄生虫病，2003，11（4）：21－22.

［责任编辑 姬 荷］

Experimental study on the activity in vitro of muscle larvae of Trichinella spiralis

DU Jingfang1，LIU Zhangnan2，FU Hao2，QIN Xiaoming2，SONG Hui 2，WANG Guoying1＊（1.Laboratory of Cellular andmolecular Immunology，Medical College，Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China ；2.Medical College Henan of University，Kaifeng，Henan 475004，China）

ObjectiveTo find a new method that for motion the activity in vitro of muscle larvae of Trichinella spiralis by controlling the temperature.MethodsThe muscle larvae were collected by the artificial digestion protocol.The body characteristics of muscle larvae were observed under different temperature conditions.ResultsThe motion of the muscle larvae was characteristically spiral like at 4℃but they were more active at 37℃.The muscle larvae were killed in 100℃ water，their shape became“C”like and their internal fine structure became disordered.ConclusionThe live muscle larvae's movement was spiral like at 4℃and their activity was greater at 37℃.The dead muscle larvae were“C”shaped and their internal structure was disrupted.

Trichinella spiralis；muscle larvae；activity；identift

R383.1

A

1672－7606（2014）02－0097－02

2014－02－10

河南省教育科学“十二五”规划2013年度立项课题 〔（2013）－JKGHC－0166〕。

都景芳（1963－），女，河南巩义人，实验师，从事实验技术与实验教学工作。

＊通讯作者：王国英（1962－），女，山西运城人，硕士，高级实验师，从事寄生虫免疫及寄生虫病流行病学的教学和科研工作。