郭秀芳

目前，Ki67与临床病理指标检测的关系研究仍有不同结论［1］。CD147蛋白能够介导细胞间的黏附，免疫球蛋白超家族的跨膜蛋白的产生来促进基质的降解［2］。2008至2012年，我们采用免疫组织化学染色方法检测了乳癌组织标本中CD147蛋白、Ki67表达，探讨两者的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料 手术切除乳腺癌标本78份，所有患者术前均未做放疗、化疗等抗肿瘤治疗。78例中年龄25～71岁;组织学分类和分化程度依据2000年世界卫生组织标准，所有标本均经10%中性缓冲甲醛固定24 h，石蜡包埋后3 μm厚连续切片，备做HE及免疫组织化学染色。

1.2 免疫组化方法 (1)烤片，烤箱62℃，2 h，二甲苯脱蜡40 min，无水乙醇、95%、85%、75%梯度乙醇10 min;(2)3%过氧化氢5 min以消除内源性过氧化物酶活性;将载玻片浸泡于PBS(pH值=6.0)中，高温高压抗原修复2.5 min;(3)10%正常山羊血清工作液封闭;滴加稀释的兔抗人Ki67抗体(稀释比1∶100)、CD147蛋白抗体(稀释比1∶100)，4℃孵育过夜;(4)滴加二抗工作液37℃反应1 h;(5)DAB显示，苏木素复染细胞核、脱水，中性树脂封片，观察实验结果。将已知乳腺癌组织阳性切片结果作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 评分标准 观察染色强度和阳性细胞百分率，染色强度:无染色为1分，中染色为2分，强染色为3分。阳性细胞百分率评分:＜5%为0分，5% ～24%为1分，25% ～49%为2分，50% ～75%为3分;＞75%为4分。两项评分的成绩0分为阴性，1～3分为(+)，4～6分为(++)，7～12为(+++)。其中(+)～(+++)为Ki67、CD147蛋白表达阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 18.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ki67在乳腺癌中与年龄关系 在78例乳腺癌患者中，20～30岁阴性 37.50%，30～50岁阴性37.50%，59～60岁阴性25%，60～70岁 ki67无表达。20～30岁阳性率(+～+++)41.42%，31～50岁阳性率25.71%，51～60岁阳性率18.57%，61 ～70 岁阳性率12.85%。年龄越小，ki67阳性率越高，增殖指数的越高表达，危险度越高，预后越差。年龄越大，ki67表达阳性率越低(r= －0.469，P＜0.05)。见表1。

表1 Ki67在乳腺癌中与年龄关系 例

2.2 CD147和Ki67阳性颗粒免疫组化染色 Ki67阳性颗粒位于细胞核内，颜色深棕，Ki67指数指100个细胞中Ki67阳性细胞数，指数＜5%为阴性。指数＞5%为阳性。CD147阳性颗粒位于肿瘤细胞的质膜上，分化好的基底部表现明显，间质细胞不表达。见图1、2。

图1 CD147阳性(免疫组化 ×40)

图2 Ki67阳性(免疫组化×40)

2.3 CD147蛋白表达与乳腺癌临床病理关系 CD147在乳腺癌病例中高分化阳性率58.06%，低分化85.10%;浸润由浅至身分别为 25.00%、39.28%、90.47%、88.00%;淋巴结无转移案例阳性率为48.07%，淋巴结转移案例阳性率为73.07%;CD147蛋白表达与乳腺癌患者的分化、浸润、和淋巴结转移有关(P＜0.05)。见表2。

表2 CD147蛋白表达与乳腺癌临床病理关系 例(%)

2.4 CD147蛋白与Ki67表达相关性 Ki67在乳腺癌案例中阴性率为5.71%，(+)约22.85%，(++)约28.51%，(+++)21.42%。CD147在乳腺癌案例中阴性率为 35.71%，(+)约 37.14%，(++)约54.28%，(+++)45.71%。CD147 阳性率越高，ki67的增殖指数越高，CD147阳性率越高恶性程度越高。CD147的高标达可促使肿瘤细胞的增殖，使ki67增值指数增高。CD147蛋白与Ki67表达呈正相关(r=0.469，P＜0.05)。见图3。

图3 CD147蛋白与Ki67表达相关性

3 讨论

乳腺癌进来发病率呈上升趋势，5年生存率为9%～40%。肿瘤抑制基因的失活或原癌基因的激活是肿瘤发生的重要环节。

肿瘤的发生、发展与细胞的异常增殖密不可分.细胞增殖是一个被高度协调机制控制的基本生物过程，人体复杂的调控机制负责胚胎的正常发育、伤害和感染等的调控，一旦调控平衡被打破，就可能产生肿瘤［3］。乳腺癌是严重危害人类健康的最常见恶性肿瘤，他的侵袭转移是导致患者死亡的重要原因，细胞外基质金属蛋白酶刺激物属于免疫球蛋白超家族［4］，在肿瘤的浸润和转移过程中，肿瘤细胞降解由基底膜和细胞外结缔组织组成的ECM，向深部浸润性生长;穿透血管壁和淋巴管壁，转移到全身各处。

Ki67抗原是一种与增殖细胞相关的核抗原，它也是目前较肯定的细胞核增殖标志基因，由于Ki67在静息细胞中表达缺乏而在增殖活跃的组织中广泛表达的特性，其半衰期短，脱离细胞周期层迅速降解，启发了人们研究将其作为细胞增殖标记物的可能性［5］。Ki67抗原在多种恶性肿瘤的表达高于其相应正常组织。研究表明，Ki67表达能可靠而迅速地反映乳腺癌组织增值率，其表达的高低对评价乳腺癌的增殖状态，年龄越低ki67增值指数越高，阳性率越高，ki67表达有重要的预后意义，是有效的预后判断指标。生物学行为的评估，肿瘤的临床化疗，推断其预后有一定指导意义。

CD147分子广泛分布于人体各个组织器官，是一种高度糖化的跨膜糖蛋白［6］。参与了机体多种生理和病理过程。CD147分子在肿瘤细胞中表达升高并与肿瘤的分化程度、浸润和转移相关，间接表达了组织细胞的恶性程度，与乳腺癌的发生发展有一定的关系。但有关CD147，在乳癌中表达的研究甚少。本研究发现，CD147在乳癌中呈高表达，与Ki67类似，CD147蛋白表达得越高，乳癌的生物学指标越差。提示其可能参与了乳癌发展和转移，在人的乳腺癌细胞中有丰富的CD147、Ki67表达。因此，以CD147分子为靶点，阻断其信号传导途径来治疗乳腺癌的理论上是成立的，为下一步的研究打下了基础。

本研究结果发现，CD147与Ki67表达呈正相关。推测在乳癌的浸润和转移中二者可能有协同作用，共同促进乳癌的演进。通过检测二者在乳腺癌中的表达，对于估计原发性乳腺癌的治疗、预后有一定的参考价值。

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