张 波，傅祖红，胡振红

(广州军区武汉总医院呼吸内科，武汉 430070)

骨骼是肺部肿瘤转移的好发部位，由于原发肺癌的部位和病理类型各不相同，其肺癌骨转移的发生率也不同[1]。临床上发生骨转移患者的病灶以多发为主，病程通常已经发展为中晚期，因此常规的肿瘤放化疗疗效差，随着以细胞和细胞因子为核心的免疫治疗技术的加速发展，免疫治疗为这类患者的痊愈带来了新的可能。而肿瘤免疫治疗的核心就是Th淋巴细胞[2]。本研究主要分析经病理证实的94例肺癌患者的Th细胞变化与肺癌骨转移的关系。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2011年1月至2014年1月广州军区武汉总医院经病理证实的肺癌患者94例作为试验组，男72例、女22例，年龄23～65(45.7±7.8)岁。其中肿瘤未转移患者53例，其中接受化疗者25例，尚未化疗者28 例；肿瘤转移患者41例，其中接受化疗者23例，尚未化疗者18 例。在发生转移并化疗者中,先化疗后转移者5例,先转移后化疗者18例，所有骨转移患者作全身骨放射性核素扫描、磁共振成像、X线平片以确诊疾病。来自本院的80例健康志愿者作为正常对照组，男65例、女15例，年龄20～71(46.2±8.3岁)。

1.2仪器及相关细胞分析软件 流式细胞仪为FACS- Calibur(美国BD公司产品)，氩离子激光器功率为15 mW，激发光波长为488 nm。用BD公司提供的Cellquest软件程序获取细胞和分析淋巴细胞中CD25+和CD3+/ CD4+细胞的百分率。每份样品分别获取2×104个细胞。

1.3方法 采集受检者静脉血1 mL，肝素抗凝，取抗凝全血100 μL，加入10 μL单克隆抗体带荧光标记试剂(CD25-FITC或CD4-FITC/CD8-PE/CY5PE)，在室温下反应30 min，然后加入2 mL溶血剂，5 min后离心去上清液，再加0.15～1.0 mL磷酸缓冲盐溶液液稀释，混匀后上机检测并分析CD25+细胞百分率或CD3+/ CD4+细胞百分率。同时设定阴性同型对照，样品在染色后6 h内检测完毕。单克隆抗体荧光试剂及同型对照试剂均采用苏州生物基因技术有限公司的试剂。

2 结 果

2.1肺癌转移对CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率的影响 各组CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率比较差异有统计学意义(P<0.01)，组间两两比较结果显示：转移组CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率显著低于正常对照组(均P<0.05)，未转移组CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率显著低于正常对照组(均P<0.05)，转移组CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率显著低于未转移组(P<0.05)(表1)。

表1 各组CD25+和CD3+/ CD4+细胞检出率比较

组别例数CD25+细胞CD3+ /CD4+细胞试验组 转移者 417.69±4.95ab22.32±7.15ab 未转移者5311.16±6.58a30.56±9.02a正常对照组8013.27±5.1536.42±8.93F13.57636.936P0.0000.000

a：与正常对照组比较，P<0.05；b：与未转移者比较，P<0.05

2.2化疗对肺癌患者CD25+和CD3+/CD4+细胞检出率的影响 各组CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率比较差异有统计学意义(P<0.01)，组间两两比较结果显示：转移化疗组CD25+和CD3+/CD4+细胞检出率高于转移未化疗组(均P<0.05)，未转移化疗组CD25+和CD3+/CD4+细胞检出率高于未转移未化疗组(均P<0.05)，转移化疗组CD25+细胞检出率低于未转移化疗组(P<0.05)(表2)。

2.3肺癌骨转移患者的化疗顺序与CD25+和CD3+/ CD4+细胞变化的关系 肺癌化疗后骨转移者在血细胞中CD25+和CD3+/ CD4+细胞百分率均低于转移后化疗患者(P<0.05)(表3)。

表2 化疗对患者CD25+和CD3+/CD4+细胞检出率的影响

治疗情况例数CD25+细胞CD3+ /CD4+细胞转移化疗者 2310.45±4.97a32.85±6.92a转移未化疗者 185.38±3.02b26.24±6.33b未转移化疗者 2515.74±5.94c38.47±5.54c未转移未化疗者286.65±2.80d24.73±6.06dF25.97325.743P0.0000.000

a与b、c与d、a与c比较，均P<0.05

表3 化疗后转移和转移后化疗者CD25+和CD3+/CD4+细胞比较

治疗情况例数CD25+细胞CD3+ /CD4+细胞化疗后转移者55.83±1.2625.72±8.39转移后化疗者1810.95±5.3734.18±7.81t2.0832.445P0.0250.012

3 讨 论

肺癌是我国发病率和病死率增长最快的恶性肿瘤之一，对人们的健康和生命具有很大的威胁[3]。肺癌的转移最常发生在骨骼，而肺癌骨转移是患者预后不良的主要因素，大部分肺癌患者的骨转移发生在确诊后1.5～2.5年内发生。据研究显示，肺癌骨转移发生率与原发癌病理类型有密切联系，骨转移发生率最高的病理类型为腺癌，其次为小细胞肺癌和鳞癌[4]。

机体免疫系统分为细胞免疫和体液免疫，它们共同监视肿瘤细胞发生、转移[5]。细胞免疫在肿瘤的免疫监视中占主体地位，而细胞恶性肿瘤患者存在免疫逃逸机制，由于机体免疫监视功能不能及时彻底清除突变细胞，或者突变细胞可以躲避宿主的监视功能，那么经过一定生长慢慢变成肿瘤。而肿瘤术后的转移可能是机体的抗肿瘤免疫功能降低所致[6-8]。细胞免疫应答的关键环节就是Th淋巴细胞亚群间接对肿瘤局部微环境的调节作用，其作用体现为Th淋巴细胞亚群通过分泌细胞因子调节杀伤性T淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等活性，起到对肿瘤细胞监视及杀伤作用，少数可直接杀伤肿瘤细胞[9-10]。而肺癌患者中Th淋巴细胞数量明显减少，生理活性减弱，不能充分发挥其免疫作用。同时,肺癌是否发生转移以及化疗与否都对Th淋巴细胞的数量及活性有着一定影响。

本研究结果提示，无论是否转移，肺癌患者CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率均较对照组有显著降低。骨转移组CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率低于未转移组。化疗对于肺癌患者的CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率也有一定影响，化疗者CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率较未化疗者均有明显提高。化疗顺序对肺癌骨转移患者也有一定的影响，肺癌化疗后骨转移者血细胞CD25+和CD3+/CD4+细胞百分率均显著低于转移后化疗患者，尤其是CD25+细胞降低更显著。

综上所述，肺癌骨转移患者机体Th细胞百分率降低，机体的免疫功能受到抑制，而化疗可以有效恢复Th细胞百分率，化疗顺序也对其有一定影响。

[1] 谭彪彬,冯学知.肺癌骨转移的临床特征及影响预后相关因素分析[J].现代诊断与治疗,2013,24(1):53-54.

[2] 贾慧民,房新志,张国庆，等.白介素17与Foxp3在ⅢA期肺鳞癌和腺癌中的表达及与预后的关系研究[J].中国全科医学,2012,15(12):1345-1349.

[3] 楠楠,申东兰,陈晓秋，等.355例恶性肿瘤骨转移的临床分析[J].中华肿瘤杂志,2010,32(3):203-207.

[4] 贺学荣.肺癌骨转移的诊断和临床特征分析[J].中华肺部疾病杂志,2009,2(1):17-19.

[5] 尤健,王长利.肺癌的免疫治疗进展[J].中国肿瘤临床,2008,35(17):1015-1017.

[6] Scherpereel A,Grigoriu BD,Noppen M.Defect in recruiting effector memory CD8+T-cells in malignant pleural effusions compared to normal pleural fluid[J].BMC Cancer，2013，13:324.

[7] 郑海燕,李赟,王兴芬，等.gp96与免疫相关基因CTLA-4、CD8在肺癌组织芯片中的表达及意义[J].中国肺癌杂志,2010,13(8):790-794.

[8] Jin CG,Chen XQ,Li J.Moderating Effects and Maintenance of Lung Cancer Cellular Immune Functions by CIK Cell Therapy[J].Asian Pac J Cancer Prev，2013，14(6):3587-3592.

[9] 李慧艳,彭大为,谢贤和，等.化疗对肺癌患者细胞免疫功能影响的研究[J].现代预防医学,2011,38(19):4093-4095.

[10] 立彦,傅雷,林艳丽，等.肿瘤病人细胞免疫功能状态及其临床意义[J].放射免疫学杂志,2010,23(3):330-332.