郝昭远 邢洪运 张 军 王 磊 孔令芳

尹洪科 魏继刚 孔 敏 马秀芳 潘振芳 （山东省曲阜市畜牧兽医工作站 273100）

刘思当* （山东农业大学动物科技学院 泰安）

为提高牛羊布鲁氏菌病和结核病（以下简称“两病”）的防控水平，促进畜牧业健康发展，增加养殖经济效益，保障畜产品质量安全。2012年6月至2013年6月曲阜市畜牧兽医工作站在全市推广实施了《牛羊结核病和布病的监测及净化工作》。现将主要技术工作报告如下：

1 全市牛羊饲养情况调查

曲阜市目前存栏牛1.06万头，存栏羊16.50万只。养牛户主要集中在鲁城、石门山、吴村、时庄、姚村、小雪、防山等镇街，饲养模式主要为圈养；养羊户除鲁城、书院、陵城外，其他几个镇街都有很多饲养场户，饲养方式除几个存栏量较多的规模场实施圈养外，其他均以散养为主，辅以放牧。

2 “两病”流行病学调查

为全面了解“两病”发生现状，科学判断牛羊“两病”的流行趋势，在全市12处镇街农业服务站(兽医站)、405名村级动物防疫员和部分养殖场(户)的积极配合下，全市开展了“两病”流行病学调查。同时，畜牧兽医部门与卫生防疫部门加强沟通，建立疫情互通机制，发现疫情及时通报，减少人畜间“两病”的传播风险。

2.1 “两病”发病情况

（1）历史上曲阜市已有十几年未有人的布病发生，但据曲阜市疾控中心统计数据显示2013年上半年本市发生了2例人的布病病例，一例发生在鲁城街道，一例发生在尼山镇。而人的结核则发病率要高的多，每年都有200多个新增病例，发病地点呈散发状态，2010年302例，2011年224例，2012年261例，2013年上半年就有147例。（2）上世纪六七十年代，本市家畜“两病”曾时常发生，通过加强流行病学调查、疫病检疫以及对阳性病畜的扑杀、无害化处理等综合防控措施，牛羊“两病”基本上已被扑灭，特别是90年代初本市实现了布病防控省级达标；十几年来，本市一直采取多种有效措施防控牛羊结核病和布病的发生，定期开展疫情监测，不断淘汰阳性病畜，阳性检出率逐年下降。但近几年随着牛羊养殖数量的增加，市场流通和动物流动性增加，“两病”的发生有所回升，虽未发生大的疫情，但防控形势异常严峻。

2.2 “两病”发病原因分析

（1）从外地引进牛羊而发生的输入性病例。“两病”疫区的病畜通过调运或直接接触造成畜间感染流行，致使部分镇街发生人畜间“两病”的交叉感染。（2）疫区传染源净化不彻底。由于部分可能染病的病畜未经检测即被养殖户卖出，未进行淘汰无害化处理，加之牛羊交易频繁，以及跨界、交叉混合放牧等原因，造成疫情向周边地区扩大蔓延。（3）群众对“两病”的危害认识不足，自我防护意识不强，处理牛羊的流产物、排泄物、分泌物以及牛羊加工、销售过程中无任何防护措施，如喂养牛羊后不洗手、消毒，污染物不消毒未做无害化处理就随地乱扔，个别农户仍存在人畜混居现象等。

2.3 牛羊流行病学调查

发放流行病学调查问卷143份，涉及全市12个镇街143个养殖场(户)。其中奶牛养殖场(户)33家，存养奶牛1986头，黄牛养殖场(户)32家，存养黄牛865头。绵羊养殖场(户)48家，存养绵羊5341只，山羊养殖场(户)30家，存养山羊2925只。被调查场(户)一共存栏牛羊11117头(只)，其中母畜存栏8336头(只)，占74.98%。本次调查的大部分养殖场户有3年以上的养殖经验，但只有44.10%对结核和布病有所了解，其余55.90%不了解甚至不知道。被调查户的怀孕牛羊4994头(只)，屡配不孕的牛羊共有53头(只)，发生在29个场(户)，出现流产37头(只)，发生在18个场(户)。消瘦、咳嗽的牛羊共有38头(只)，发生在12个场(户)。在本次调查中，有16个场(户)从外地购进过牛羊，但大部分购进的牛羊没有检疫合格证明。牛羊发病后自己诊治的有78个场(户)，占54.55%，请兽医诊治的有65个场(户)，占45.45%。被调查的33个奶牛养殖场(户)中自己人挤奶的有21个，雇人挤奶的有12个。76.2%的养殖场户对饲养场进行定期消毒，23.8%养殖场户从不消毒。仅有25.2%养殖场户进行过实验室检测。

3 “两病”的检测诊断

3.1 牛结核病的检测

3.1.1 材料和方法 （1）试验材料：结核菌素(哈药集团生物疫苗有限公司生产，批准文号兽药生字(2012)201008)、游标卡尺(精度为0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、胶靴、记录表等。（2）检测的牛群：曲阜市所有奶牛场户100%进行抽样，根据场户的规模大小计算抽样数量。具体抽样数量见表2。肉牛场(户)的抽样数量根据年初下达的检测计划进行抽样。（3）试验方法：采用牛型提纯结核菌素皮内变态反应(PPD)试验。①操作方法：注射部位及术前处理：将检测牛编号后在颈侧中部上1/3处剪毛(或提前1d剃毛)，3个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。注意术部应无明显的病变。注射剂量不论大小牛只，一律皮内注射0.1ml(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后，皮内注射0.1ml。冻干PPD稀释后当天用完。注射方法：先以75%酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD，注射后局部应出现小疱，如对注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重做。注射次数和观察反应：皮内注射后经72h判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二次皮内注射，再经72h观察反应结果。对阴性牛和疑似反应牛，于注射后96h和120h再分别观察1次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。②结果判定：阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0mm；疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm；但只要有一定炎性肿胀，即使皮厚差在2.mm以下仍应判为可疑；阴性反应：无炎性反应。皮厚差在2.0mm以下。凡判定为疑似反应的牛，于第一次检疫60d后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60d再复检，如仍为疑似反应则判为阳性。

表1 曲阜市奶牛场户抽样数量 (头)

3.1.2 结果与分析 （1）奶牛结核病初检及可疑病例复检结果。

从表2可以看出，对于初检结果可疑的64头牛，间隔60d复查，结果44头判定为阴性，20头判定为阳性。

表2 奶牛结核病初检及可疑病例复检结果 (头)

3.2 牛羊布病检测

3.2.1 试验材料与方法 （1）血清的制备与保存：由颈静脉穿刺采集牛羊全血，待血清析出时，分装入离心管，放于4℃冰箱用于试验检测，将其他备份血清放于-20℃冰箱冻存。（2）试剂：布氏杆菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验抗原、阳性血清、阴性血清均购自青岛易邦生物工程有限公司。（3）血清检测：对采集的1379份牛羊血清首先使用布氏杆菌病虎红平板凝集试验初步检测，凡初检结果为疑似或阳性的，再使用试管凝集试验进行复检。（4）虎红平板凝集试验方法及判定标准：参照国家标准GB/T18646-2002动物布氏杆菌诊断技术，在灭菌洁净的玻璃板上，分别吸取被检血清30μl与虎红平板凝集抗原30μl混合均匀，同时以阳、阴性血清作对照。在4min内出现肉眼可见凝集现象判为阳性，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性。（5）试管凝集试验(SAT)方法及判定标准：首先稀释血清，稀释度依次为 1:12.5、l:25、1:50、1:100。加入等量稀释后的抗原，混匀，则血清稀释度依次为l:25、1:50、1:100、1:200。同时做阴性对照和阳性对照及抗原对照，并配制比浊管。将全部试管、对照管及比浊管充分振荡后置37℃温箱24h，取出检查并记录结果。参照比浊管，按各试管上层液体亮度判读。①++++菌体完全凝集，100%下沉，上层液体100%清亮；②+++菌体几乎完全凝集，上层液体75%清亮；③++菌体凝集显著，液体50%清亮；④+凝集物有沉淀，液体25%清亮；⑤－凝集物无沉淀，液体均匀混浊。

3.2.2 结果与分析 （1）奶牛检测结果与分析。（2）肉牛检测结果与分析。（3）羊血清学结果与分析。

表3 奶牛布氏杆菌病初检及可疑病例复检结果 (头)

由表3可知，初检结果中有25头牛判为疑似病例，经试管凝集试验复检，1个样品试管凝集物无沉淀，液体均匀混浊，为阴性，24个样品试管菌体几乎完全凝集，上层液体75%清亮，判定为阳性。

表4 肉牛布氏杆菌病初检及可疑病例复检结果 (头)

由表4可知，初检结果中284头牛全部判为阴性。

表5 羊布氏杆菌病初检及可疑病例复检结果 (头)

由表5可知，初检结果中607只羊判为阴性，3只羊判为阳性。

4 讨论

通过这次调查发现，曲阜市牛羊“两病”尤其是布氏杆菌病感染率较低。在采集的1379份血样中，有24份奶牛血清为阳性。并且集中出现在两个奶牛场，通过进一步了解得知阳性牛都是今年上半年从外地购进的，在购进之前没有进行“两病”检测，也没有动物检疫合格证明。对于检出的阳性牛、羊及时采取了隔离、扑杀、焚烧、深埋、消毒等无害化处理，并认真做好登记备案、消毒灭源疫点等清除工作，达到布氏杆菌病的净化目的。

曲阜市作为布氏杆菌病流行地区，对布氏杆菌病检测净化理应高度重视，但在调查中发现：（1）仍有部分养殖户不了解布病相关防控知识，因此今后必须加这方面的知识宣传，提高养殖户的自我防范意识和防控技能 。（2）动物防疫不足，污染源无害化处理不彻底。（3）职能部门对布病的防控措施不到位，在免疫、检疫、监测、淘汰阳性畜、消毒等各环节中都不同程度的存在一些问题，今后需加强基层兽医站的建设，增加防检设备投入，提高业务人员素质；加强检疫督查，对牲畜交易市场、定点屠宰场、农贸市场加大检疫督查力度，严禁未经检疫或检验不合格牲畜及产品进入市场，对各种违法行为要严肃处理，将传入风险降至最低。

5 小结

曲阜市《牛羊结核及布病检测与净化》项目实施一年来，取得了显著成效，圆满完成了计划任务目标。

5.1 建立了牛羊“两病”的检测净化体系 通过项目实施，培训了一批熟练掌握“两病”检测的技术人员，积累了大量的“两病”防控实践经验，总结制订了符合我市实际的“两病”防控技术工作流程，对今后“两病”的进一步防控和净化具有重要的推动作用。

5.2 取得了显著的经济和社会效益 通过疫情控制和检测净化的设施，使牛羊流产率降低了5%，提高了生产性能及产品质量，获得直接经济效益300多万元。通过项目实施，逐步普及了“两病”防控知识，提高了养殖从业人员的自我防护意识，有效切断了人畜间的疫病传播途径，减少了人的感染几率，消除了人们对牛羊肉的恐慌心理，促进了社会和谐稳定，维护了公共卫生安全。

5.3 完成了全市牛羊饲养情况调查 通过这次“两病”流行病学调查，初步摸清了全市牛羊的饲养状况，对今后牛羊病的防控以及健康养殖的推动提供了科学决策依据。

5.4 完成了人畜间“两病”的流行病学调查 通过开展“两病”流行病学调查工作，掌握了“两病”在人畜间感染流行情况，为本市人畜“两病”的监测、防控奠定了基础。