方城县仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

2014-03-19兰振旗河南省方城县畜牧局473200

山东畜牧兽医 2014年3期

兰振旗（河南省方城县畜牧局 473200）

仔猪黄白痢又称新生猪腹泻，是仔猪黄痢和仔猪白痢的合称，都是由埃希氏大肠杆菌在肠道内产生毒素所引起的急性肠道传染病。目前，仔猪黄白痢是常见和多发的传染病，特别是仔猪黄痢发病率高，死亡率高。而仔猪白痢虽发病率高，死亡率低，但常引起病猪脱水消瘦，如不及时治疗，多数死亡或转为慢性，即使恢复也成为僵猪。目前，已分离的仔猪黄痢、白痢的血清型众多，各血清型疫苗之间有效的交叉保护性差，这给黄白痢的防治造成一定难度。并且大肠杆菌对药物极易产生抗药性，如青霉素、链霉素、土霉素、四环素、庆大霉素等抗生素几乎没有治疗作用。因此防治本病时，有条件的地方应进行药敏试验选择敏感药物，或选用本场过去少用的药物进行全群给药，可收到满意效果。尽早发现，早期投药可控制早期感染的病猪，促使痊愈，同时可防止新发病例的出现。据不完全统计，在方城县猪场中，仔猪黄白痢的发病率在50%左右，死亡率在5%左右，本次试验即对方城县范围内仔猪黄白痢的致病菌群进行药敏试验，以期对县内养殖户和猪场的仔猪大肠杆菌病的有效防治提供帮助。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料的采集病料来自我县35个养猪场，共69份样品，其中15个养殖场猪仔黄痢肛门拭子病料27份，20个养殖场猪仔白痢肛门拭子病料42份。

1.1.2 主要试剂培养基及细菌鉴定用的生化试剂等方城县畜牧局疫病测报站实验室提供。

1.1.3 供试药片头孢噻肟、氟苯尼考、沙拉沙星、庆大霉素等含药纸片。

1.1.4 试验动物清洁级昆明系小白鼠雌雄各半，共10只。

1.2 试验方法

1.2.1 病原菌的分离培养从养猪场采集患有黄白痢猪仔的肛门拭子病料，将其浸入到灭菌生理盐水中，充分洗脱，将其悬浮液分别划线接种于麦康凯琼脂培养基上，37℃培养24h，然后挑取麦康凯琼脂培养基上的粉红色、表面光滑的31个单个菌落分别接种到营养琼脂斜面上，37℃培养24h后，置冰箱保存备用。

1.2.2 菌体形态观察将上述培养基上所得的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检，观察细菌形态以及染色特征，将符合大肠杆菌形态特征的进行生化试验，否则弃之。

1.2.3 生化试验将上述分离出的纯培养物进行糖发酵试验、吲哚试验、MR试验、VP试验、枸橼酸盐试验，观察其变化并记录结果。

1.2.4 致病性试验将符合生化反应符合大肠杆菌特性的菌株接种营养琼脂平板，37℃培养18h后，用生理盐水洗下菌落制成菌悬液。将小白鼠随机分为两组，其中一组每只皮下注射0.2ml菌悬液，另一组注射相同剂量的无菌生理盐水。将24～48h左右死亡的小鼠立即解剖，并且用接种环取其心血接种于营养琼脂培养基上，并对分离出的菌株进行进一步鉴定。

1.2.5 药敏性试验将稀释好的菌液每个平板接种0.1ml，使菌液铺满整个平板，待平板干后，用无菌镊子取各种药片贴于平板上，每个平板5张药片，每个药片之间的距离不小于3cm，将贴好药片的平板置于37℃的恒温箱中培养24h后观察实验结果并测出个药片的抑菌圈直径，并按照标准判定敏感，中度敏感和耐药情况。

2 结果

2.1 分离培养特性在麦康凯琼脂培养基上均呈粉红色、光滑湿润、边缘整齐的菌落；在普通琼脂培养基上呈灰白色、圆形、整齐、隆起、光滑湿润的菌落，与大肠杆菌的形态特征相符。

2.2 染色镜检分离菌株革兰氏染色为阴性小杆菌，两端钝圆，多单个存在，与大肠杆菌染色特性相符。

2.3 生化鉴定分离出的菌株均能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇，均能产酸产气，大多数菌株不利用蔗糖，少数缓慢发酵，VP实验、枸橼酸盐试验均为阴性，吲哚试验、MR试验均为阳性，以上试验结果可证明分离出的菌株为大肠杆菌。

2.4 致病性试验试验组的小白鼠在接种后出现精神萎靡，进而出现稀泻等临床症状，接种10h后开始死亡，24h内全部死亡，解剖死小白鼠，均能见其内脏充满淤血，肝脏肿大，并且在心血和肝脏中能分离出大肠杆菌，而对照组的小白鼠无明显变化，由此可见，从猪仔肛门处分离出的大肠杆菌具有较强的致病性。

2.5 药敏性试验对分离出的菌株进行药敏性试验，其结果如附表所示。

结果表明，分离菌对庆大霉素、卡那霉素、阿莫西林、头孢唑啉、氨苄青霉素、氟苯尼考、培氟沙星、淋必治、复方新诺明、强力霉素10种药物具有的耐药性，对沙拉沙星、阿奇霉素、头孢拉啶、福利平4种药物较为敏感，对其余的药物中度敏感。

3 讨论

（1）通过以上实验研究可以证明从猪场分离的31株菌株，经培养特性、形态、生化试验、致病性试验表明均为致病性大肠杆菌，而且有较强的致病性。（2）药敏试验结果表明31株大肠杆菌分离菌株对庆大霉素、卡那霉素、阿莫西林、头孢唑啉、氨苄青霉素、氟苯尼考、培氟沙星、淋必治、复方新诺明、强力霉素10种药物具有的耐药性，对沙拉沙星、阿奇霉素、头孢拉啶、福利平4种药物较为敏感，对其余的药物中度敏感，这为预防和治疗该病提供了理论依据。从研究结果也可以看出分离的致病性大肠杆菌对很多药物产生了较强的耐药性，这可能是因为这些猪场的猪长期服用这些药物从而产生了耐药性，因此饲养员在给猪用药时要合理搭配，不能长期服用一种或几种药物，要定期更换，以免产生耐药性，而且还应该定期进行药敏性试验，以便指导临床用药。（3）防治措施：通过使用敏感药物沙拉沙星、阿奇霉素、头孢拉啶、福利平进行仔猪大肠杆菌病的治疗，取得了理想的效果。但是在部分猪场不能很好地控制该病，这与临床上滥用抗生素关系密切，导致了大肠杆菌的耐药性。目前防治仔猪大肠杆菌病所采取的措施之一是给临产母猪注射大肠杆菌多价菌苗，即在母猪临产前15d和45d各注射1次大肠杆菌多价菌苗。但注射菌苗后所产仔猪仍发生仔猪黄白痢，表明引起仔猪黄自痢的大肠杆菌血清型与其所用菌苗的血清型不一致。猪场应根据本场的实际情况，制备自家仔猪大肠杆菌铝胶灭活苗，免疫母猪，以此来获得较好的预防效果。仔猪大肠杆菌病要综合防范，除了用自家苗免疫母猪外，还要提高仔猪抵抗力，搞好母猪和产房环境卫生，严格执行消毒制度，搞好猪瘟等重大疫病的基础免疫工作，只有这样才能较好的预防并减少仔猪大肠杆菌病的发生。