离子色谱法检测生鲜乳中硫氰酸根改进初探

2014-03-19徐秀玲穆阿丽山东省青岛市饲料兽药检测站266071

山东畜牧兽医 2014年3期

李辉徐秀玲穆阿丽（山东省青岛市饲料兽药检测站 266071）

在生鲜乳中掺入硫氰酸钠，可以抑菌、保鲜，延长生鲜乳的保存期，但是硫氰酸钠在人体内释放的氰根离子能很快与细胞色素氧化酶中的三价铁离子结合，抑制该酶活性，使组织不能利用氧，可引起重度中毒，少量的食入就会对人体造成极大伤害。2008年12月硫氰酸钠被卫生部列入第一批公布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，被认为是可能违法添加的非食用物质。

硫氰酸根检测的常见方法有滴定法、光谱法、色谱法、电分析法和离子交换色谱法等。2009年卫生部公布了基于离子色谱的硫氰酸根检测方法是基于戴安公司离子色谱，其前处理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，离心后稀释上清液进行测定，色谱条件采用梯度洗脱。

本文研究了采用等度洗脱的离子色谱仪器检测，对生鲜乳中硫氰酸根检测方法进行了优化调整。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂瑞士万通850型离子色谱仪(配电导检测器、858自动进样器)；固相萃取小柱：Supelclean LC-18 SPE Tubes；硫氰化钾标准品(纯度≥98.5%)。

1.2 标准溶液的配制准确称取于80℃烘箱内烘干2h的硫氰化钾1.6986g于1000ml容量瓶中，定容，混匀，得1000mg/L硫氰酸标准储备液。取硫氰酸标准储备溶液1ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，此溶液含硫氰酸10mg/L。移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml硫氰酸标准中间液，用水定容至10ml，浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mg/L。

1.3 色谱条件色谱柱Metrosep A Supp 5-250/4.0mm、检测器电导检测器、淋洗液3.2mmol/L Na2CO3+1.0mmol/L NaHCO3+7.5%Acetone、流速0.7ml/min、柱温30℃、进样体积20μl。

1.4 样品前处理准确量取液态奶样品4ml，加入5ml色谱纯丙酮，涡旋混匀，10000r/min离心3min，取上清液用超纯水稀释2倍，过经5ml甲醇和10ml水活化的LC-18小柱除去样品中的脂肪，然后上机进行样品检测。

2 结果与分析

2.1 样品色谱图图1为硫氰酸根标准品图谱，可见保留时间在19min左右。图2中自上而下，图谱1、2、3依次是牛奶样品经过丙酮、乙腈和5%乙酸沉淀蛋白后的测试图，经过丙酮沉淀蛋白后的样品干扰更少，检测结果更为理想。

2.2 线性范围和检出限在上述色谱条件下，以测定标准系列溶液的浓度(mg/L)为横坐标，硫氰酸色谱峰面积(μS×min)为纵坐标，绘制标准曲线，见图3。

回归方程为A=4.75726E-3×Q-2.72040 E-3，R=0.999869，硫氰酸离子色谱具有良好响应值，峰面积与标准系列浓度呈良好的线性关系，线性范围0.1～5.0mg/L。以3倍信噪比计算求得仪器检出限为0.082mg/L。

2.3 方法的选择卫生部推荐的“离子色谱法测定牛奶中硫氰酸根”方法前处理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，然后稀释样品进行测定，色谱条件采用梯度洗脱。该方法前处理过程简单，但色谱条件采用梯度洗脱，离子色谱仪必须具备梯度洗脱功能才能实现；且在测定冻融过的生鲜乳样品时，容易出现上清液与沉淀分离不彻底的问题，上清液浑浊、杂质较多，容易堵塞小柱，增加了实验成本，浪费人力物力，尤其不利于对大批量生鲜乳样品的监督检测。

通过查阅文献，比较了乙酸溶液、乙腈和丙酮沉淀蛋白，选择用丙酮沉淀蛋白，净化更为充分，其溶液组成与所使用的淋洗液组成成分更相近，更利于硫氰酸根的检测，试验结果比较理想。另外采用等度洗脱，拓宽了离子色谱仪的选择范围。