陶社学 李金兴 雷玉艳 林 爽 (新疆医科大学研究生院，乌鲁木齐 830011)

近年来，国内外关于载脂蛋白E(APOE)启动子区多态性与冠心病(Coronary heart disease，CHD)相关性研究日益增多，但在不同人种及种群研究中，结果不尽相同，考虑可能与不同人群中APOE 基因上游转录调控区域点突变或多态性不同有关〔1，2〕。本研究从新疆汉族及新疆第二大少数民族哈萨克族出发，探讨两民族冠心病患者载脂蛋白E 基因启动子区多态性在两民族之间的分布是否存在差异。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取长期生活在新疆地区的具有一定民族代表性的哈、汉民族冠心病病人，根据冠脉造影结果及WHO 1979 年CHD 诊断标准确定冠心病组。其中符合冠心病诊断标准哈萨克族104 例，平均年龄64 岁，男性占59.26%，有冠心病、高血压病家族史者占14.8%。汉族冠心病人97 例，平均年龄65 岁，男性占62%，有冠心病家族史者占9.6%;有高血压家族史的占17.0%;其中冠心病合并高血压的患者占57.5%，冠心病合并糖尿病患者占25.6%。本研究开始前，已告知患者并得到患者及其家属知情同意。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取ApoE 启动子区基因型的测定 采集哈、汉两民族冠心病病人空腹血液标本，ACD抗凝，蛋白酶K 消化后，酚-氯仿抽提提取DNA［3］;利用SNaPshot SNP 分型技术对所得201 个样本进行3 个SNP 位点分型。具体实验步骤:(1)电泳DNA 样本对其进行质量检查以及浓度的估计;(2)PCR 反应，PCR 引物:rs405509F:GCACAGGAAAGGACAGGGTCAG;rs405509R:CAGTCACGAGGTGGGCTGTTCT;rs449647F:TCCCTCTTGCTGAGGCTGGAGT;rs4-49647R:GCCACGTGGGCGAATCACTTA;rs7259620F:GGAGCCAGGAATGAGT-CCCAGT;rs-7259620R:GCACGGGTATGTTTGGTGA-CAA;反应体系(20 μl)包含1 ×GC Buffer Ⅰ，3.0 mmol/L Mg2+，0.3 mmol/L dNTP，1 U HotStarTaq polymerase (Qiagen Inc.)，1 μl 样本DNA 和2 μl 多重PCR 引物。再对PCR 产物进行纯化。(3)SNaPshot 多重单碱基延伸反应延伸引物:rs405509SR:TTTTTTTTTTTTTTTAGGACACCTCGCCCAGTAAT;rs449647SR:TTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGAATCAC-TTAAGGTCAGGAG;rs7259620S-R:TTTTTTTTCCGTGGTTCAGCAGCAAGA。延伸反应体系(10 μl)包括5 μl SNaPshot Multiplex Kit(ABI)，2 μl 纯化后多重PCR产物，1 μl 延伸引物混合物，2 μl 超纯水。……