刘林生，方 功，王定勇*

(1.佛山市中医院 药剂科，广东 佛山 528000；2.广东药学院 药科学院，广东 广州 510006)



大叶钩藤叶子化学成分研究

刘林生1，方 功2，王定勇2*

(1.佛山市中医院 药剂科，广东 佛山 528000；2.广东药学院 药科学院，广东 广州 510006)

目的：对茜草科钩藤属植物大叶钩藤(UncariamacrophyllaWall.)的叶子进行化学成分研究。方法：用甲醇提取及柱色谱等方法进行分离，薄层色谱跟踪检测，波谱法鉴定结构。结果：从该植物叶子中共分离鉴定出6个化合物，分别是柯诺辛碱(1)、、异钩藤碱(2)、钩藤碱(3)、熊果酸(4)、表儿茶素(5)、山奈酚(6)。结论：该实验首次报道了大叶钩藤叶子的非挥发性化学成分。

大叶钩藤；柯诺辛碱；熊果酸

大叶钩藤(UncariamacrophyllaWall.)为茜草科钩藤属植物，为常用中药。临床多用于治疗头晕目眩、惊痫抽搐、全身麻木等心血管和神经系统疾病，现已成为治疗高血压方剂中常用药物[1]。大叶钩藤的化学成分已有报道：杨君等[2]对大叶钩藤钩茎进行了化学成分研究；李国成等[3]报道了大叶钩藤根的化学成分；王冬梅等[4]对大叶钩藤叶的挥发油进行了GC-MS分析，共检出127个色谱峰，鉴定了其中的85种成分；笔者[5-8]曾对大叶钩藤茎的生物碱和非生物碱的化学成分、总生物碱的提取方法等进行了研究。作为大叶钩藤基础研究的一部分，本文对大叶钩藤叶子中非挥发性成分进行研究，利用现代提取分离和结构鉴定方法，从中获得6个化合物，分别为柯诺辛碱(1)、异钩藤碱(2)、钩藤碱(3)。熊果酸(4)、表儿茶素(5)、山奈酚(6)。现报道如下。

1 仪器与材料

X-6型显微熔点测定仪(温度未校正, 北京泰克仪器有限公司)。核磁共振用Bruker AM-500 型核磁共振仪测定(TMS为内标,瑞士Bruker公司)；ESI-MS 在 Agilent 6120 LC/ MS 上测定(美国Agilent公司)；PerkinElmer Spectrum-100型红外光谱仪(KBr压片,美国PerkinElmer公司)。层析用硅胶(青岛海洋化工厂),层析用中性氧化铝(天津市大茂化学试剂厂)。有机溶剂均为分析纯(天津市富宇精细化工有限公司)。大叶钩藤叶子2012年10月采自广东省阳春市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为大叶钩藤(UncariamacrophyllaWall.)的叶子。

2 提取与分离

大叶钩藤叶子2.5kg，粉碎后用甲醇回流提取3次，减压回收甲醇得浸膏350g，然后用3%HCl溶液溶解过滤，得不溶物(A部分)和滤液(B部分)。B部分用氨水中和至pH 9～10， 然后用氯仿萃取5次，回收氯仿得氯仿萃取物15.5g。氯仿萃取物经中性氧化铝柱层析，石油醚—丙酮梯度洗脱，氯仿与丙酮混合溶剂重结晶，得到柯诺辛碱(1,63mg)、异钩藤碱(2,35mg)和钩藤碱(3,20mg)。A部分经硅胶柱层析，氯仿—甲醇梯度洗脱，甲醇重结晶，得到熊果酸(4,85mg)、表儿茶素(5,60mg)和山奈酚(6,30mg)。

3 结构鉴定

化合物 1：白色针状晶体(CHCl3)，mp 155.0～157.0℃。ESI-MS(m/z): 383.1[M-H]-。IRνmax(KBr) cm-1: 3170, 3060, 3020, 2930, 2778, 1700, 1615, 1243, 753。13CNMR (125 MHz, CDCl3) δ: 182.2 (C-2), 73.5 (C-3), 53.8 (C-5), 34.8 (C-6), 57.2 (C-7), 133.9 (C-8), 124.9 (C-9), 122.0 (C-10), 128.1 (C-11), 109.6 (C-12), 140.0 (C-13), 25.4 (C-14), 39.1 (C-15), 111.8 (C-16), 161.2 (C-17), 12.8 (C-18), 19.6 (C-19), 40.5 (C-20), 54.6 (C-21), 169.2 (C-22), 52.3 (-COOCH3), 61.2 (- OCH3)。1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ: 9.02 (1H, s, NH-1), 2.37 (1H, dd, J=11.4, 2.7 Hz, H-3), 3.21 (1H, m, H-5b), 2.42 (1H, ddd, J=8.7, 8.7, 8.7 Hz, H-5a), 2.35 (1H, dd, J=9.4, 2.0, H-6b), 2.02 (1H, m, H-6a), 7.44 (1H, d, J=7.3 Hz, H-9), 7.02 (1H, ddd, J=7.5, 7.5, 0.9 Hz, H-10), 7.15 (1H, ddd, J=7.7, 7.7, 1.0 Hz, H-11), 6.88 (1H, d, J=7.7 Hz, H-12), 1.80 (1H, ddd, J=12.9, 2.7, 2.7 Hz, H-14b), 2.76 (1H, dt, J=13.3, 3.6 Hz, H-15), 7.20 (1H, s, H-17), 0.85 (1H, t, J=7.3 Hz, H-18), 1.65 (1H, m, H-19b), 1.05 (1H, m, H-19a), 1.48 (1H, brd, J=11.3 Hz, H-20), 3.17 (1H, dd, J=7.6, 2.1 Hz, H-21b), 2.15 (1H, dd, J=11.1, 2.1 Hz, H-21a), 3.57 (-COOCH3, s), 3.49 (-OCH3, s)。以上数据与文献[5]报道的柯诺辛碱一致。

化合物 2：白色粉末，mp 152.5～154.0 ℃。ESI-MS(m/z): 383.2[M-H]-。IRνmax (KBr) cm-1: 3418, 3040, 2942, 2785, 1703, 1700, 1634, 1615, 1240, 741。13CNMR (125 MHz, CDCl3) δ: 180.8 (C-2), 72.8 (C-3), 54.6 (C-5), 36.4 (C-6), 57.2 (C-7), 135.2 (C-8), 125.0 (C-9), 122.6 (C-10), 127.5 (C-11), 109.4 (C-12), 140.8 (C-13), 29.1 (C-14), 37.9 (C-15), 112.9 (C-16), 159.7 (C-17), 11.2 (C-18), 24.5 (C-19), 38.2 (C-20), 59.1 (C-21), 169.2 (C-22), 51.2 (-COOCH3), 61.3 (- OCH3)。1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.11 (1H, s, NH-1), 7.42 (1H, s, H-9), 7.21 (1H, s, H-17), 7.02 (1H, m, H-10), 7.16 (1H, t, J=7.6 Hz, H-11), 6.88 (1H, d, J=7.6 Hz, H-12), 3.56 (3H, s, COOCH3), 3.75 (3H, s, OCH3), 3.34 (1H, dd, J=3.7, 11.0 Hz, H-21b), 3.29 (1H, dd, J=1.5, 8.5 Hz, H-5b), 2.51 (1H, dd, J=8.5 Hz, 17.3 Hz, H-5a), 2.41 (1H, dd, J=1.5, 8.8 Hz, H-6b), 2.09 (1H, dd, J=4.2, 8.8 Hz, H-6a), 1.78 (1H, t, J=11.0 Hz, H-21a), 1.49 (1H, d, J=11.9 Hz, H-14b), 1.10 (1H, d, J=11.2 Hz, H-14a), 0.82 (3H, t, J=7.3 Hz, H-18)。以上数据与文献[5]报道的异钩藤碱一致。

化合物 3：白色针晶(CHCl3)，mp 202.0～203.0 ℃。ESI-MS(m/z): 383.2[M-H]-。IRνmax(KBr) cm-1: 3410, 3040, 2940 2785, 1723, 1700, 1630, 1610, 1238, 745。13CNMR (125 MHz, CDCl3) δ: 180.5 (C-2), 76.8 (C-3), 55.6 (C-5), 35.4 (C-6), 56.8 (C-7), 135.5 (C-8), 124.2 (C-9), 122.9 (C-10), 128.5 (C-11), 109.5 (C-12), 142.8 (C-13), 31.1 (C-14), 38.9 (C-15), 112.8 (C-16), 160.7 (C-17), 11.8 (C-18), 24.6 (C-19), 40.2 (C-20), 58.6 (C-21), 169.5 (C-22), 51.3 (-COOCH3), 61.8 (- OCH3)。1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ: 9.06 (1H, s, NH-1), 7.28 (1H, d, J=7.5 Hz, H-9), 7.31 (1H, s, H-17), 7.15 (1H, m, H-11), 7.02 (1H, m, H-10), 6.84 (1H, d, J=7.6 Hz, H-12), 3.74 (3H, s, OCH3), 3.56 (3H, s, COOCH3), 3.25 (1H, dd, J=3.8, 12.0 Hz, H-21b), 3.22 (1H, m, H-5b), 2.45 (1H, dd, J=7.8, 2.2 Hz, H-5a), 2.36 (1H, dd, J=7.8, 4.4 Hz, H-6b), 1.97 (1H, m, H-6a), 1.62 (1H, t, J=10.5 Hz, H-21a), 1.94 (1H, m, H-14b), 0.95 (1H, m, H-14a), 0.79 (3H, t, J=7.3 Hz, H-18)。以上数据与文献[5]报道的钩藤碱一致。

化合物 4：白色针状晶体(MeOH)，mp 285.6～287.0℃。ESI-MS(m/z): 455.2[M-H]-; IR νmax(KBr) cm-1: 3435, 2964, 2928, 2871, 1688, 1456, 1387, 1032, 998, 951, 875, 850, 821, 660。13CNMR (125 MHz, CDCl3) δ: 38.3 (C-1), 26.9 (C-2), 76.8 (C-3), 38.7 (C-4), 54.8 (C-5), 18.0 (C-6), 32.7 (C-7), 39.0 (C-8), 40.1 (C-9), 36.5 (C-10), 22.8 (C-11), 124.5 (C-12), 138.1 (C-13), 41.6 (C-14), 27.5 (C-15), 23.8 (C-16), 46.8 (C-17), 52.3 (C-18), 38.5 (C-19), 38.4 (C-20), 30.2 (C-21), 36.3 (C-22), 28.2 (C-23), 15.2 (C-24), 16.0 (C-25), 16.8 (C-26), 23.2 (C-27), 178.1 (C-28), 16.9 (C-29), 21.0 (C-30)。1HNMR (500 MHz, CDCl3) δ: 5.13 (1H, t, J=3.6 Hz, 12-H), 3.75 (1H, dd, J=10.4, 4.6 Hz, 3-H), 0.68 (3H, s), 0.75 (3H, s, Me), 0.87 (3H, s, Me), 0.89 (3H, s, Me), 1.05 (3H, s, Me), 0.80 (3H, d, J=6.5 Hz, Me), 0.92 (3H, d, J=6.3 Hz, Me)。以上数据与文献[6]报道的熊果酸一致。

化合物 5：淡黄色结晶(MeOH)，mp 228.0～229.5 ℃。ESI-MS (m/z): 291.1[M+H]+。13CNMR (125 MHz, CD3OD) δ:158.3 (C-7), 157.8 (C-9), 150.8 (C-5), 146.2 (C-3’), 146.1 (C-4’), 132.6 (C-1’), 119.7 (C-5’), 116.2 (C-6’), 115.6 (C-2’), 100.4 (C-10), 96.7 (C-6), 96.2 (C-8), 80.2 (C-2), 67.8 (C-3), 29.5 (C-4)。1HNMR (500 MHz, CD3OD) δ: 2.72 (1H, dd, J=16.8, 3.0 Hz, H-4), 2.85 (1H, dd, J=16.8, 4.7 Hz, H-4), 4.17 (1H, br.s, H-3), 4.81 (1H, br.s, H-2), 5.90 (1H, d, J=2.3 Hz, H-8), 5.93 (1H, d, J=2.3 Hz, H-6), 6.57 (1H, d, J=8.2 Hz, H=5’), 6.78 (1H, dd, J=8.2, 1.8 Hz, H-6’), 6.98 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2’)。以上数据与文献[9]报道的表儿茶素一致。

化合物 6：黄色针状结晶(MeOH)，mp 275.0～276.5 ℃。ESI-MS (m/z): 285.2[M-H]-。13CNMR (125 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm: 176.2 (C-4), 164.2 (C-7), 161.5 (C-9), 160.5 (C-4’), 156.0 (C-5), 146.2 (C-2), 135.9 (C-3), 130.3 (C-2’, 6’), 123.0 (C-1’), 116.3 (C-3’, 5’), 103.0 (C-10), 98.7 (C-6), 93.5 (C-8)。1HNMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 12.45 (1H, s, 5-OH), 8.01 (2H, d, J=8.7 Hz, H-2’, 6’), 6.91 (2H, d, J=8.7 Hz, H-3’, 5’), 6.42 (1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, J=2.0 Hz, H-6)。以上数据与文献[10]报道的山奈酚一致。

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(责任编辑：宋勇刚)

Chemical Constituents of the Leaf ofUncariaMacrophyllaWall.

Liu Linsheng1, Fang Gong2, Wang Dingyong2*

(1.Department of Pharmacy, Fushan Hospital of TMC, Guangdong 528000, China;2.College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

Objective:To study the chemical constituents of leaf of Uncaria macrophylla Wall.Methods:The plant was extracted by MeOH, then separated and repeatedly purified by methods of chromatography, TLC for tracking and detection. Their structures were elucidated by IR, MS and NMR. Results:Six compounds were isolated from the leaf of U. macrophylla Wall. and identified as corynoxine (1), isorhynchophylline (2), rhynchophylline (3), ursolic acid (4), epicatechin (5) and kaempferol (6). Conclusion:The non-volatile constituents of leaf ofU.macrophyllaWall was reported for the first time.

UncariamacrophyllaWall.; Corynoxine; Ursolic Acid

2014-07-03

广东省中医药局科研课题(No.20132030)

刘林生(1982-)，男，广东省佛山市中医院主管中药师，研究方向为医院药学。

王定勇(1967-)，男，博士，广东药学院教授，硕士生导师，研究方向为天然药物活性成分。E-mail：wdingyong@163.com。

R284.1

A

1673-2197(2014)21-0010-02